鱼类白细胞介素4的基因克隆和表达分析

来源 :浙江大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jill818
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本文成功克隆了河豚IL-4 cDNA全序列,并在毕赤酵母系统中诱导表达了重组IL-4。河豚IL-4 cDNA:全长834bp,包括39bp的5非编码区(5UTR),375bp的3非编码区(3UTR)和420bp的开放阅读框架(ORF),其翻译得到的多肽含139个氨基酸,预测分子量约16.131kDa。河豚IL-4基因与已知的哺乳动物和鸟类有相同的结构,即由四个外显子和三个内含子组成。它的编码蛋白与其他同源体有11%-16%的同源相似性。用优化条件的RT-PCR半定量估测IL4在河豚各个组织中的表达水平,结果显示,IL-4在所选组织中均为组成性表达,包括头肾、脾脏、肝脏、大脑、鳃、肌肉和心脏,其中头肾、脾脏和肝脏的表达量较低。IL-4的组成性表达与它对免疫细胞因子调节的潜在作用是相一致的。用2 μ g ConA、2 μ g PHA和2μg PMA的混合诱导剂刺激河豚,可以发现IL-4在以上所检测组织中的表达量显著上升,这一结果也预示了有丝分裂原激活IL-4的炎症免疫应答。此外,成功构建了重组表达质粒pPIC9k-IL4,并将其重组整合入GS115毕赤酵母基因组,通过组氨酸缺陷型培养基MD和G418筛选获得含有多个拷贝的毕赤酵母转化子,经甲醇诱导,在毕赤酵母表达系统中检测到约16kDa的条带,与预期的重组蛋白大小相一致。这是关于鱼类IL-4的克隆、鉴定和表达的首例报道。
其他文献
棉花是世界性的重要经济作物。棉纤维是一种优良的天然纤维,是重要的纺织工业原料。由于纺织工业加工速度的不断加快和人民生活水平的提高,对棉纤维品质提出了越来越高的要求,要求较强、较细和纤维整齐的棉花新品种。品种资源的范围狭窄,缺乏综合性状优良的理想品种以及育种手段落后是造成棉花品质育种徘徊不前的主要原因。目前棉花的优质纤维基因主要来自美国的Acala系统和PD系统,经由远缘杂交渐渗而来,而且由于连锁累
学位
采用多相分类方法对分离自中国温带地区和亚热带地区胡枝子的88个根瘤菌菌株进行了分类。采用的多相分类方法包括表型性状测定及其数值分类、ARDRA(16S rDNAPCR-RFLP)、全细
本试验于2005~2006在河南师范大学小麦试验田进行,选用冬小麦品种郑州9023为试验材料,开展室内盆栽试验、露天盆栽试验,研究了八种修复剂对As胁迫下小麦生长发育的影响,并对小麦成
华北落叶松是冀北山区的主要造林树种,华北落叶松人工林在木材生产、防风固沙、涵养水源、保持水土等方面发挥着重要的作用。冀北山地土壤理化性质的变化将会直接影响到该地区
文昌鱼(Amphioxus)是介于无脊椎动物和脊椎动物之间的过渡类型,是研究动物进化和胚胎发育的典型材料。利用分子生物学手段,研究文昌鱼有关基因的结构、进化和表达,可以揭示文昌
背景缺血性脑血管病(Ischemic cerebrovascular disease,ICVD)是威胁人类健康的重要疾病,虽然既往研究识别了多种危险因素,但是仍有许多缺血性脑血管病人不能用已知危险因素解释