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背景:刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种具有复杂生命周期的专性细胞内寄生原虫,被认为是一个重要的人畜共患病病原体。它呈世界性分布,其宿主来源广泛,能够感染人类、家畜等大多数哺乳动物和鸟类。据统计,世界上大约1/3的人口呈血清阳性,弓形虫感染主要引起弓形虫病,对于胎儿和免疫受损的个体可造成严重的疾病。当前尚无合理的药物去抵抗弓形虫,因而研制有效的疫苗去控制弓形虫是刻不容缓的。巨噬细胞移动抑制因子(MIF)作为介导先天性和适应性免疫应答的关键上游细胞因子,获得了人们的广泛关注。目前已经在许多寄生物种中发现了MIF的同源物,且亦从弓形虫中分离出了MIF的同源物。基于MIF这些作用,本研究将制备的重组弓形虫MIF(rTgMIF)蛋白肌肉注射BALB/c小鼠,评估该蛋白疫苗的免疫原性。通过评估TgMIF蛋白是否能作为抵抗弓形虫的候选疫苗分子,为弓形虫病的预防和疫苗的研制提供实验依据。目的:探索弓形虫巨噬细胞移动抑制因子(TgMIF)蛋白是否能成为抵抗弓形虫病的候选疫苗分子,这为未来弓形虫病的预防和蛋白疫苗的研制提供了新的线索。方法:通过生物信息学对TgMIF的理化性质和抗原表位等进行分析。将构建的重组pET-28a-TgMIF质粒转化入Rosetta大肠杆菌中诱导表达,利用考马斯亮蓝染色以及Western Blot对纯化的rTgMIF蛋白及细胞蛋白进行鉴定。将240只6至8周的SPF级雌性BALB/c小鼠随机分为空白组,PBS组,2.5μg组,5.0μg组,10.0μg组,20.0μg组,每组40只。经纯化的rTgMIF蛋白通过大腿肌肉注射方式免疫小鼠,共免疫三次。免疫完成后,每组小鼠血清特异性抗体IgG水平通过ELISA检测。然后将各组小鼠脾淋巴细胞用rTgMIF蛋白刺激进行培养,通过CCK-8试验检测淋巴细胞增殖情况。分别在24h和96h收集经蛋白刺激的脾细胞培养液上清,用ELISA检测上清中IL-4和IFN-γ含量。末次免疫后两周,选择最佳剂量组与两组对照组进行弓形虫感染实验,每组随机挑选30只小鼠腹腔注射1×10~3 RH速殖子,观察统计30天,计算小鼠的存活率;同时每组随机选取3只小鼠通过灌胃感染20个Pru包囊,两个月后计数各组小鼠脑组织包囊数,用来评估rTgMIF蛋白疫苗的免疫效果。结果:(1)利用DNASTAR软件对TgMIF蛋白进行分析,结果表明,TgMIF蛋白的大多数区域是亲水性区域和可变区域,抗原指数良好,具有很强的免疫原性,猜测其具有成为弓形虫疫苗候选分子的潜能;(2)通过考马斯亮蓝染色可知,rTgMIF蛋白在Rosetta菌中被成功诱导表达及纯化,在特定位置得到一个预期的13KD左右的分子条带;用Western Blot检测,兔抗TgMIF多克隆抗体只能特异性识别弓形虫TgMIF蛋白,不能识别弓形虫14-3-3蛋白,证明rTgMIF表达成功;(3)小鼠血清特异性抗体IgG水平,所有免疫组IgG水平明显高于空白组与PBS组(p<0.001),并且随着免疫次数增加而增高,其中5μg蛋白免疫效果最佳(p<0.001);(4)小鼠脾淋巴细胞增殖试验表明,5μg免疫的小鼠脾细胞在rTgMIF蛋白刺激下显著增殖(p<0.05);(5)细胞因子结果显示,IFN-γ水平在rTgMIF免疫组中显著增加(P<0.001)IL-4略有增加(P<0.01);(6)RH速殖子感染小鼠后,存活率曲线显示,空白对照组与PBS组两组小鼠均在10天内死亡,rTgMIF免疫组小鼠在第30天还有25%的小鼠存活(P<0.001),存活时间显著延长;(7)从各组小鼠脑内Pru包囊计数可知,rTgMIF免疫组的小鼠脑包囊数显著降低(P<0.01)。结论:本研究证明弓形虫巨噬细胞迁移抑制因子(TgMIF)在BALB/c小鼠体内能够成功引起强烈的Th1/Th2免疫,并且以Th1特异性免疫应答占主导地位。接种rTgMIF蛋白疫苗的小鼠能有效抵抗急性和慢性弓形虫感染。TgMIF具有良好的免疫原性,可作为一个抗弓形虫病的潜在疫苗分子。