布鲁氏菌病是一种严重的人畜共患传染病，在世界范围内均有流行。针对布鲁氏菌病，目前广泛应用的是减毒活疫苗，但减毒活疫苗尚存在毒力回复的危险。基因工程疫苗可以克服这一问题，但传统的基因工程疫苗往往采用注射的方式接种，不能引发粘膜免疫。转基因植物疫苗则可克服以上缺点，其不仅使用安全，而且通过饲用或食用的方式接种，还可引发粘膜免疫。本试验采用紫花苜蓿中苜一号为受体植物，将布鲁氏菌rOmp3148-74-BLS基因转化苜蓿，从而获得苜蓿转基因植株。研究内容大致如下：首先以LIC引物对rOmp3148-74-BLS基因进行PCR扩增，从而使其两端带有LIC序列。同时利用Apa I对载体pJG045进行酶切。利用不依赖于连接反应的克隆（LIC）的方法将布鲁氏菌rOmp3148-74-BLS基因克隆到植物表达载体pJG045上，构建成重组载体pJG-OB。经双酶切鉴定以及质粒DNA测序鉴定，证明重组载体pJG-OB构建成功。测序结果与rOmp3148-74-BLS基因序列完全一致。构建成功的重组载体为大肠杆菌-农杆菌穿梭质粒，利用三亲本杂交法，将其转化农杆菌AGL0。将携带有重组质粒的大肠杆菌DH5α作为供体菌，农杆菌AGL0作为受体菌。二者在帮助菌大肠杆菌HB101的作用下将重组质粒转入农杆菌AGL0。通过农杆菌菌落PCR鉴定，最终筛选出阳性农杆菌用于苜蓿的侵染。农杆菌侵染前首先获得苜蓿无菌苗，然后利用无菌苗制备苜蓿无菌子叶外植体和下胚轴外植体。再用活化后的农杆菌菌液侵染预培养后的苜蓿外植体。经共培养、脱菌处理后，通过筛选培养获得苜蓿转基因外植体。再经愈伤组织诱导培养和继代培养获得健康的苜蓿愈伤组织。然后经分化培养使愈伤组织分化并产生不定芽。再经壮苗培养，从而获得苜蓿再生苗。然后将再生苗接种到生根培养基进行生根培养。生根后的苜蓿再生苗经炼苗后将PCR鉴定阳性的苜蓿植株移栽至培养土内培养，最终获得转基因苜蓿植株。本试验采用LIC法将布鲁氏菌rOmp3148-74-BLS基因克隆到植物表达载体pJG045上，然后通过三亲本杂交法转化农杆菌AGL0。利用农杆菌介导法，将布鲁氏菌rOmp3148-74-BLS基因转化苜蓿。最终通过PCR鉴定筛选并获得转基因苜蓿植株。本试验作为布鲁氏菌转基因植物疫苗研究和开发的最初步骤，为该领域的研究奠定了理论和实践基础。