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目的 本研究采用氧化低密度脂蛋白（oxidized low-density lipoprotein，ox-LDL）诱导血管内皮细胞（vascular endothelial cells，VEC）损伤，建立VEC氧化损伤模型，观察大豆异黄酮（soybean isoflavone，SI）对氧化损伤VEC的保护作用，并探讨其机制，为研究SI预防动脉粥样硬化（Atherosclerosis，AS）的发生提供科学依据。 方法 1．体外VEC氧化损伤模型的建立：体外培养人脐静脉血管内皮细胞（Human umbilical vascular endothelial Cells，HUVEC），用Cu2+引发LDL脂质过氧化，产生的ox-LDL诱导HUVEC损伤，24h后收集细胞。实验分空白对照组（control）、ox-LDL 1～6组（MDA含量分别为0.2、0.5、0.8、1.0、1.2、1.5nmol／ml），测定各组细胞胞浆蛋白含量、四唑盐（MTT）指标及control组、ox-LDL 3、4、5组细胞丙二醛（MDA）含量，并观察各组细胞形态变化。2．SI对体外VEC氧化损伤保护作用的研究：（1）SI对正常VEC的直接作用实验：实验分control组、SI不同浓度组（SI浓度分别为5、10、25、50、100、200μmol／L）。将不同浓度SI与生长融合成单层的VEC共同孵育24h，收集细胞，测定各组细胞MDA含量、超氧化物歧化酶（SOD）及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活性。（2）SI与不加细胞LDL、ox-LDL的体外孵育实验：①SI对LDL的氧化抑制作用：实验分非氧化LDL组（N-LDL）及(Cu2++LDL)与不同浓度SI（SI浓度分别为0、5、10、25、50、100、200μmol／L）共同作用组，作用时间为24h。每隔4h测定各组样品的蛋白及MDA含量。②SI对ox-LDL的逆转录作用：实验分N-LDL组及ox-LDL与不同浓度SI（SI浓度分别为0、5、10、25、50、100、200μmol／L）共同作用组，作用时间为24h。测定各组样品的蛋白及MDA含量。（3）SI对VEC氧化损伤的保护作用：实验分control组、氧化损伤对照组（ox-LDL，其MDA含量为1.0nmol／ml）、氧化损伤加入维生素E对照组（VE+ox-LDL，VE浓度为50μmol／L）、氧化损伤加入SI低、中、高浓度组（SI-L+ox-LDL、SI-M+ox-LDL、SI-H+ox-LDL；SI浓度分别为10、50、100μmol／L）。取融合生长为单层的细胞，按剂量分组加入VE、SI预孵24h，再与除菌后的ox-LDL继续培养24h，收集细胞，测定各组细胞活力及抗氧化指标，检验各组单核细胞-内皮细胞天草医群才笋砰法笋夕触戈中文摘要 （MC一EC）粘附率，计算各组细胞凋亡指数（AI），并对各组细胞进行光镜、电镜的形态学观察。 结果1.体外俄氧化损伤模型的建立:ox一LDLI、2、3组与control组组间两两比较，胞浆蛋白含量、MTT（OD）指标，无显著性差异（P>0.05），且四组细胞形态相似:ox一LDL4、5、6组与control组组间两两比较，胞浆蛋白含量、MTT（OD）均有显著性差异（P<0. 01），且依次明显降低，ox一LDL4组（MDA含量为1 .onmol/ml）细胞变形，但细胞边界尚清楚，而ox一LDLS、6组细胞变形明显，胞膜边缘不清晰，有较多细胞脱落。另外，ox一LDL3组与Control组比较，细胞MDA含量无显著性差异‘（P>0.05），而ox一LDL4、5组细胞MDA含量均明显高于control组（P<0 .01），且依次升高。2.51对体外兜C氧化损伤保护作用的研究:（l）SI对正常VEC的直接作用实验结果显示:10200 p mol/LSI可使细胞MDA含量和SOD活性不同程度的降低或升高，差异有显著性（P<0.01）;但是对GSH一Px活性无影响，差异无显著性 （P>0.05）。（2）SI与不加细胞LDL、ox一LDL的体外孵育实验结果显示:①SI对LDL的氧化抑制作用:在8h24h各时间段组，SI各浓度组MDA含量均明显低于，ox一LDL组，差异有显著性（P<0.01）。②SI对ox一LDL的逆转录作用:S工各浓度组与ox一LDL组组间两两比较，MDA含量无显著性差异（P>0.05），且均高于N一LDL组(P（0.01）。（3）51对VEC氧化损伤的保护作用:eontrol、vE+ox一LDL及（51一L、M、H）+ox一LDL组分别与ox一LDL组比较，细胞胞浆蛋白含量、MTT（OD）、SOD活性、GSH一PX活性及一氧化氮（NO）含量均显著升高，差异有显著性（P<0.01），MDA含量、乳酸脱氢酶（LDH）释放百分比、MC一EC粘附率及AI均显著降低，差异有显著性（P<0.01），且由细胞计数计算的细胞存活率远远高于ox一LDL组，而由MTT（OD）计算的细胞抑制率（IR）远远低于ox一LDL组。此外，51一M+ox一LDL组与VE+ox一LDL组比较，各指标均无显著性差异（P>0 .05）。倒置相差显微镜观察vEC，ox一LDL组细胞变形，细胞间隙增大;S工一L十。x一LDL组与ox一LDL组比较，细胞形态无明显改善，但细胞间隙缩小，细胞间连接增加;（SI一M、H）+ox一LDL组与ox一LDL组比较，细胞形态明显好转，细胞形态基本恢复正常，而VE+ox一LDL组细胞形态与51一M+ox一LDL组相似。扫描电镜观察VEC，可见。ontrol组细胞呈多边形，表面微绒毛丰富;而ox一LDL组细胞明显变形，表面微绒毛减少甚至消失;S工一M十。x一LDL组细胞胞膜表面均匀散布着短小的微绒毛;VE+ox一LDL组与天单医澎才笋砰毖笋夕绘戈中文摘要S卜M+。x一LDL组细胞形态相似。 浩恰1.ox一LDL可诱导VEC损伤，且其内MDA含量不同，对VEC的损伤程度不同。ox一LDL中MDA含量为1 .onmol/ml时为适合实验研究的损伤浓度。2.51可增强VEC自身抗氧化能力，可?