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背景宫颈癌是世界范围内女性最常见的第三大肿瘤,在我国宫颈癌居女性生殖道恶性肿瘤的首位。在过去的几十年中,尽管影像学技术、外科手术、化疗和放疗取得了很大的进步,但是对于复发转移癌的病人治疗效果依然不尽人意。因此急切需要找到有意义的分子标志,为宫颈癌的诊断治疗措施开辟新的途径。STOML-2是新近发现的stomatin家族的一员,在多种恶性肿瘤中高表达,对恶性肿瘤的作用尚不明确。对其功能研究不多,尚处于初步研究阶段,有限的研究表明STOML-2具有稳定线粒体膜、参与线粒体融合、调节线粒体离子通道的功能。目的分析STOML-2在宫颈癌中的表达及其与临床病理特征及预后的关系,探讨STOML-2在宫颈癌中的生物学功能。材料和方法1.细胞培养宫颈癌细胞株HeLa、SiHa、C33A、Ca ski、Hcc94,由中山大学肿瘤医院实验研究部631室保存,用加入了10%FBS(Hyclone)的DMEM或1640(Gibco)培养。2.组织标本收集中山大学肿瘤医院1999年～2005年的宫颈癌标本300例、10例正常宫颈组织标本以及19例宫颈癌患者的新鲜手术标本,包括癌组织及对应的癌旁组织。3. RT-PCR和Western blot在转录和翻译水平检测STOML-2的表达。4.免疫组化采用免疫组化(LSAB)的方法检测300例宫颈癌组织、10例正常宫颈组织的表达及19例宫颈癌患者癌组织和对应癌旁组织的表达。5. siRNA的设计应用siRNA设计软件初筛出9对siRNA,再通过BLAST分析剔除与其他编码基因有同源性的siRNA,最后经RNA结构分析软件分析将对应的基因序列位于二级结构的siRNA去掉,选出三条对靶向STOML-2的siRNA。6.瞬时转染宫颈癌HeLa、HCC94细胞采用脂质体转染技术将STOML-2-siRNA转染HeLa、HCC94细胞,转染48小时后进行相应检测。7. Western-blot检测干扰后STOML-2的蛋白表达水平8. Annexin V-FITC/PI、TUNEL法检测细胞凋亡情况9.统计学方法采用SPSS13.0软件进行分析,计量资料以均数±标准差(X±x)表示。STOML-2在宫颈癌组织中的表达及STOML-2与宫颈癌癌各临床病理因素的相互关系采用χ2检验。采用Logistic回归模型分析盆腔淋巴结转移的危险因素。采用Kaplan-Meier法,Log-Rank检验比较生存曲线的差异。采用Cox比例风险模型分析影响生存预后的因素。采用独立样本t检验比较凋亡实验各组间差异。各检验过程均以P<0.05(双侧检验)认为差异有统计学意义。结果1. STOML-2在宫颈癌细胞株中高表达宫颈癌细胞株HeLa、SiHa、C33A、Ca ski、Hcc94中STOML-2在转录和翻译水平表达高于正常对照组织。2. STOML-2在宫颈癌组织中高表达在19对宫颈癌病人组织中,癌组织的STOML-2在转录和翻译水平都比对应的癌旁组织表达高,比值都在2倍以上。3. STOML-2在宫颈癌中高表达且与SCCA、深肌层浸润、淋巴脉管浸润、盆腔淋巴结转移相关,是独立的预后因子。SCCA与STOML-2是盆腔淋巴结转移的高危因素。STOML-2的高表达与宫颈癌的SCCA (χ2=9.014, P=0.003).深肌层浸润(χ1=5.321,P=0.021)、淋巴脉管浸润(χ2=4.050,P=0.044)、盆腔淋巴结转移情况(χ2=38.668,P<0.001)相关。STOML-2的阳性表达与其年龄、性别、Figo分期、肿瘤大小、病理分类、病理分级、宫旁浸润无显著相关性。Logistic回归模型多因素分析显示治疗前SCCAg≧1.5ngml(P<0.001,OR=5.361)、 STOML-2表达(P<0.001,OR=6.810)为盆腔淋巴结转移独立的危险因素。Kaplan-Meier法分析5年生存曲线,STOML-2低表达的宫颈癌患者5年生存率为92%,而STOML-2高表达的宫颈癌患者5年生存率仅为78%,STOML-2低表达组的总体生存率优于STOML-2高表达组,统计学上(Log-Rank检验)有显著性差异(χ2=11.615,P=0.001),且随着STOML-2表达的增强,总体生存曲线有逐渐下降的趋势。COX回归分析显示STOML-2表达对预后有影响(P=0.001,RR=3.881)。4. RNAi沉默STOML-2表达后,对细胞生物学功能的影响RNA干扰48小时后,使用顺铂诱导HeLa、HCC94细胞凋亡,当达到半数细胞死亡时,行TUNEL法、Annexin V法检测。结果显示,STOML-2被沉默后,HeLa、HCC94细胞的凋亡数增多,结果有统计学差异。结论1. STOML-2在宫颈癌细胞株、癌组织中高表达且与SCCA、深肌层浸润、淋巴脉管浸润、盆腔淋巴结转移相关,并且是宫颈癌独立不良预后因子；2. STOML-2是宫颈癌盆腔淋巴结转移的独立危险因素；3. STOML-2沉默后,HeLa、HCC94细胞株凋亡增多,可能作为一种肿瘤进展基因起作用,其在宫颈癌的发生、发展过程中发挥抗凋亡作用；4. STOML-2有可能成为判断宫颈癌患者进展及预后的一个新分子标志物,为宫颈癌的预后判断及治疗提供了新的分子靶点。