提取高质量的土壤微生物基因组总DNA是PCR扩增检测土壤样品中目标微生物的重要前提。但由于土壤样品种类繁多、组成也相对复杂,且微生物细胞常紧紧吸附在土壤的颗粒表面,很难分离,经常会导致DNA提取时菌体裂解不完全,DNA条带弥散。此外土壤中存在的大量腐殖酸等抑制剂可能会残留在DNA溶液中,导致提取的DNA纯度差,抑制下游PCR扩增。虽然已有国外品牌如MP公司的商品化试剂盒可以较好的解决这些问题,但其长期处于市场垄断地位,售价昂贵,无形增加科研成本。有鉴于此,本文研制了一种快速、简便、经济、高效的复杂土壤微生物DNA提取试剂盒用于替代进口品牌,并对含腐殖酸抑制物的PCR扩增做了一些优化探索。1、根据土壤样品的特点,研发了一种高得率、高纯度的土壤微生物DNA提取试剂盒。与3款市场主流的商业化试剂盒（MP、天根、Omega）相比,其综合提取性能与进口MP Fast DNA?Spin Kit for Soil相当,在提取一些样品时（粉尘和淤泥）得率优于天根生化的土壤基因组DNA提取试剂盒和Omega的土壤DNA小量提取试剂盒。本课题研制的土壤DNA提取试剂盒使用成本低,仅需进口MP试剂盒的四分之一,非常适合商业化推广应用。2、为克服提取的土壤微生物DNA中可能存在的少量腐殖酸等污染物对PCR扩增的抑制,我们探索对比了人血清白蛋白（HSA）、马血清白蛋白（ESA）、牛血清白蛋白（BSA）、鸡血清白蛋白（CSA）和猪血清白蛋白（PSA）是否都有增强PCR耐抑制性的效果以及是否存在效果上的差异。结果表明5种血清白蛋白都能增强PCR耐抑制性,其中HSA抵抗腐殖酸的效果最强,在PCR体系中最低只需1 ng/μL即可解除2 ng/μL的腐殖酸造成的抑制,而解除同等腐殖酸抑制作用所需最低ESA和PSA浓度为100 ng/μL、BSA为10 ng/μL、CSA为1μg/μL。稳定性试验结果证明,只有HSA在37℃下保存21天后仍有抵抗腐殖酸抑制作用的能力,稳定性高于BSA（14天）、PSA（14天）、CSA（7天）、ESA（7天）。因此HSA可以替代传统优化剂BSA成为新型增强PCR耐抑制性的优化剂。3、除了上述5种血清白蛋白之外,我们进一步探索了8种动物源性蛋白对PCR是否有优化作用,8种动物源性蛋白分别为免疫球蛋白G（IgG）,组蛋白（Histone）,粘蛋白（Mucoprotein）,血红蛋白（Hemoglobin）,胰蛋白酶（Trypsin）,肌动蛋白（Actin）,亲和素（Avidin）和胶原蛋白（Collagen）。试验结果证明只有IgG和Mucoprotein具有增强PCR耐抑制性作用,其作用浓度为10 ng/μL及以上（≥10 ng/μL）,其余6种蛋白均未发现有优化PCR的作用。根据这些发现,我们还研制出了一种可以极大增强PCR耐抑制性的复合蛋白添加剂,将HSA、IgG和Mucoprotein等浓度混合（20μg/μL）后可以抵抗最高6 ng/μL的腐殖酸干扰,很好的解决了土壤DNA溶液中残留的腐殖酸抑制PCR扩增的困扰。