核酸催化反应调控及应用研究

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长期以来,核酸通常被认为仅仅是生命体遗传信息的载体。在1994年,研究者证明非天然DNA酶具有催化活性。随着深入的研究,越来越多具有催化作用的核酸被发现。它们能够催化各种类型的反应,主要包括DNA酶催化裂解RNA或DNA、DNA自催化脱嘌呤、DNA磷酸化、DNA催化连接DNA、DNA催化卟啉金属化、DNA催化Diels-Alder反应。在生理过程中,核酸催化作用和生命体的健康息息相关。核酸催化不仅使DNA结构具有多样性,并且可能诱发基因突变和进化。催化作用的核酸具有易修饰、价格低、稳定性高、特异性强等优点,因此在生物传感器领域得到了广泛应用。本文中,我们主要针对核酸催化反应中的DNA自催化脱嘌呤和Cu2+依赖性DNA酶催化裂解进行了调控和研究。主要研究内容如下:1.特异性位点的自催化DNA脱嘌呤的荧光检测脱嘌呤通过嘌呤-脱氧核糖糖苷键的水解而发生,并引起核酸损伤。尤其是,可以自催化脱嘌呤(SCD)的DNA序列会在复制、分离、纯化和存储DNA样品方面造成很大的不确定性。因此,迫切需要开发一种用于快速检测SCD事件的方法。在本文中,证明了使用便捷的荧光方法来追踪位点特异性SCD的可能性。我们发现,脱嘌呤所产生的缺碱基位点(AP位点)可以被具有荧光响应开启的黄藤素(PAL)荧光探针选择性识别。SCD对于脱嘌呤位点、pH、金属离子和时间的依赖性实验表明,我们的方法可用于快速评估脱嘌呤的过程。此外,可以使用光酸作为外部引发剂来对脱嘌呤过程进行光切换。我们的工作将在初步鉴定DNA脱嘌呤方面获得广泛的应用。2.免修饰的Cu2+依赖性DNA酶催化裂解的荧光检测传统的金属离子依赖性的DNA酶催化裂解的检测需要对DNA进行修饰,这不仅费时而且昂贵。在这项研究中,我们证明使用白屈菜红碱(CHE)标记Cu2+依赖性的DNA酶并检测其催化裂解的可行性。CHE和Cu2+依赖的DNA酶中的三链体结构结合产生较强的荧光信号。引入Cu2+以及抗坏血酸钠(SA)后,底物链的裂解导致三链体被破坏,从而标记的CHE脱落导致荧光响应大幅降低。基于这种用荧光小分子标记Cu2+依赖性的DNA酶检测其裂解的方法,我们探究了pH,Cu2+浓度,SA浓度,催化时间和底物链序列对DNA裂解的影响。此外,该方法对Cu2+具有较高选择性,为金属离子的传感平台构建提供了新的可能。
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