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虾青素是一种萜烯类的类胡萝卜素,具有良好的着色功能和极强的生物活性。不同来源的虾青素由不同的同分异构体组成,其活性之间也存在较大差别。雨生红球藻是天然虾青素的主要来源,其虾青素主要以虾青素酯的形式存在。但由于虾青素酯结构的复杂性及传统分离纯化方法的局限性,目前高效分离纯化虾青素酯的研究尚不多见。本论文使用高速逆流色谱(HSCCC)分离纯化雨生红球藻虾青素酯,应用HPLC和ESI-MS进行结构鉴定,进一步研究虾青素酯的生物活性,并建立鉴定不同来源虾青素的方法,主要实验结果如下:(1)以总类胡萝卜素含量为指标,通过单因素和正交试验设计,优化得到雨生红球藻中类胡萝卜素提取的最佳条件为:破壁温度50 oC、破壁时间30 min、纤维素酶浓度0.6 mg/mL、酶反应pH 4.0,优化后提取物中总类胡萝卜素的含量高达59.62±0.31 mg/g DW,比优化前提高了25%。(2)应用正己烷-乙腈-甲醇(4:1:2,v/v/v)和正己烷-甲醇(2:1,v/v)两种溶剂体系,首次利用高速逆流色谱(HSCCC)技术从100 mg雨生红球藻粗提物中分离纯化得到角黄素(10.35 mg)、虾青素十六碳二烯酸单酯(8.47 mg)、虾青素亚麻酸单酯(15.65mg)、虾青素亚油酸单酯(6.05 mg)、β-胡萝卜素(15.25 mg)、虾青素棕榈酸-二十二碳二烯酸双酯(4.33 mg)。(3)以虾青素和维生素E为对照,研究虾青素单酯的抗氧化活性。结果表明,虾青素单酯清除ABTS+、·OH自由基的EC50值分别为7.09±0.20μg/m L和11.08±0.76μg/m L,清除能力强于维生素E,但弱于虾青素;对油脂过氧化具有一定的抑制作用;具有一定的铁离子还原能力,其FRAP值为0.236±0.021 mmol/L。以熊果苷和奥利司他为对照,测定了虾青素单酯对蘑菇酪氨酸酶和胰脂肪酶的抑制作用。结果表明,当虾青素单酯浓度为800μg/mL时,对蘑菇酪氨酸酶的抑制率为39.48%;虾青素单酯对胰脂肪酶有较好的抑制作用,IC50值为9.85±0.02μg/m L。(4)使用YMC Carotenoid C30(4.6×250 mm)色谱柱,采用单因素试验法优化得到分离虾青素异构体的最佳HPLC条件。样品浓度:5 mg/m L,进样量:20μL,流速:1.0mL/min,柱温:35 oC,检测波长:474 nm,流动相:甲醇-乙腈-MTBE。在此基础上建立了一种鉴定不同来源虾青素的方法。本论文的实验结果为虾青素酯的大量制备和开发利用以及不同来源虾青素的鉴定提供理论依据和技术支持。