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乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)属于嗜肝病毒科(Hepadnaviriaae)。因其引发的疾病感染性强、难治愈而被人熟知。慢性HBV感染是导致肝癌的主要因素之一。虽然已有有效的乙型肝炎疫苗和多种药物在很大程度上控制了HBV感染及相关疾病,但HBV感染致病的具体分子机制仍不明朗。HBV与其宿主肝细胞之间的相互作用仍需要被进一步阐明。微小RNA(microRNA,miRNA)是内源基因编码产生的非编码、短的RNA。成熟miRNA是单链的,其长度为20-22nt。它自身的种子序列通过碱基互补配对靶向特定基因mRNA的3’UTR,从而沉默或者降解靶mRNA,达到干扰基因表达的目的。microRNAs在细胞代谢、病毒感染和细胞免疫的过程中有着至关重要的影响。随着研究的深入,它在HBV与宿主肝细胞的一系列复杂的相互作用中的功能也逐渐在被人们揭示。miRNAs通过靶向病毒蛋白或者宿主内源的特定基因,既可以达到抑制HBV复制的目的,也可以起到协助HBV感染的作用。因为HBV既可以调控自身或宿主的miRNAs靶向靶标mRNA,帮助自身的感染和复制,也可以控制细胞生命的活动,达到免疫抵抗和逃逸的目的。在本研究中,我们通过将含有HBV基因组的质粒瞬时转染进Huh7肝癌细胞后,证明HBV能够明显地促进Huh7的迁移和侵袭能力。同时,我们通过过表达或突变HBx的方法,证明HBV通过HBx促进肝细胞迁移和侵袭。我们发现HBV存在时,细胞内源性miR-520c-3p的表达水平明显上升。进一步实验证明HBV是通过HBx促进miR-520c-3p的表达。而我们的实验发现瞬时转染miR-520c-3p的模拟物miR-520c-3p-mimic也可以明显促进肝癌细胞的迁移,瞬时转染该miRNA的抑制子—miR-520c-3p-inhibitor则抑制肝癌细胞迁移。进一步的实验表明,HBV是通过HBx调控miR-520c-3p来影响肝癌细胞的迁移。为了探讨其具体分子机制,我们通过生物信息学预测和实验证明其靶基因为抑癌因子PTEN。由于Akt是PTEN/PI3k信号通路下游蛋白,它磷酸化是活化的标识。接着我们不仅证实了 miR-520c-3p能够通过PTEN相应地影响下游Akt的磷酸化。更重要的是,回复实验发现,miR-520c-3p-inhibitor抑制内源miR-520c-3p的作用,能够回复HBV对PTEN的抑制作用;而同时转染siPTEN,则siPTEN干扰掉miR-520c-3p-inhibitor的回复功能,最终仍然是HBV或HBx,促进Akt磷酸化水平。为了确证HBV通过miR-520c-3p靶向PTEN而调节Akt磷酸化水平,达到调控肝癌细胞的迁移和侵袭的功能,我们使用特异性抑制Akt的磷酸化的MK2206抑制剂,实验发现HBV、miR-520c-3p对Huh7迁移的促进作用消失。这些实验结果表明HBV是通过miR-520c-3p/PTEN/Akt/pAkt影响迁移的。接着,我们探索了 NF-κB的抑制剂SC-514处理转染pHBV1.3的细胞,结果表明SC-514其也能抑制HBV对细胞迁移的促进作用。这些结果暗示了 NF-κB参与了 HBV通过miR-520c-3p/PTEN/Akt/pAkt影响的肝癌细胞的迁移,后续实验将进一步确证。此外,我们还发现miR-520c-3p能够抑制Ⅰ型干扰素IFN-β1启动子的活性,抑制HBV表面抗原HBs和HBe Ag的表达水平。总之,我们的研究结果表明,HBV可以通过HBx上调内源miR-520c-3p,从而直接抑制靶蛋白PTEN的表达,进一步促进PTEN下游Akt的磷酸化水平。Akt的磷酸化激活后促进了细胞的迁移。我们的实验结果为进一步了解miRNAs在HBV与宿主间的相互作用提供了线索,为寻找相应的临床药物提供了潜在的作用靶点。