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糖脂代谢异常是2型糖尿病主要特征,是引起糖尿病心血管并发症的主要原因,肝脏糖异生和脂质代谢在糖尿病治疗及并发症预防上至关重要。目前寻找扭转糖尿病糖代谢及脂代谢紊乱的药物是我们亟待解决的问题。Mirco RNA是一类内生性长约19-22个核苷酸,在转录后水平能够直接将靶标m RNA降解或抑制蛋白质的翻译。近年来的研究报告指出,mi R122作为肝脏特异性micro RNA,受核因子HNF4α的调控,进而影响脂质合成和β氧化的关键蛋白(SREBP-1/FAS/ACCα/CPT-1)的表达,在脂质代谢调控中具有重要作用,而核因子HNF4α亦是糖异生关键酶表达的重要调节因子。因此,我们推测mi R122可能是糖脂代谢调控的重要元件,是肥胖及2型糖尿病治疗的新靶点。黄连素又称盐酸小檗碱(Berberine,BBR)是中国传统中药,具有明显的降血糖降血脂的作用,对脂质合成及氧化相关的多个关键限速酶具有调控作用,但目前黄连素发挥降血糖、降血脂的分子机制尚不清楚,对糖脂代谢调控是否存在串话通路也未阐明。而且,黄连素虽然有显著的降血糖作用,但因其口服后肠道吸收较差而且在体内的生物利用度较低限制了其作为降血糖药物的临床应用,那么针对这一缺陷,本课题组前期成功制备了黄癸固体分散体,并通过药物吸收动力学方面(在体、整体、细胞)探讨了制备的黄癸固体分散体能够增强黄连素的吸收作用;而且在药效学方面也证明了黄癸固体分散体降糖的明显作用,且1/4剂量的黄癸固体分散体即能达到同等黄连素剂量的治疗效果,为黄癸固体分散体作为降血糖药物的开发和利用提供了新的、可行的策略。其次,课题组也首次发现,黄连素孵育4h后进入肝细胞核,能够抑制HNF4α,PGC1,FOXO1等核因子表达,同时抑制肝糖异生关键酶G6Pase和PEPCK的表达。由此我们推测黄连素的作用靶点可能位于细胞核,并通过调控核因子HNF4α的表达,抑制mi R122的表达从而发挥其调节糖脂代谢紊乱的作用。本课题首先拟建立高脂饮食联合小剂量链脲佐菌素注射诱导2型糖尿病C57BL/6小鼠模型,探讨黄连素和黄癸固体分散体对2型糖尿病小鼠体内HNF4α/mi R122的表达,脂质代谢关键蛋白(SREBP-1/FAS/ACCα/CPT-1)及肝糖异生关键蛋白(G6Pase/PEPCK)表达的影响,结果显示,在模型制备成功4周后,与正常对照组相比,模型组小鼠空腹血糖、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、血清和肝组织中mi R122表达明显升高,胰岛素水平、高密度脂蛋白明显降低,HE染色显示肝细胞肿胀、变性,肝索排列紊乱,且局部伴有有炎症和坏死的现象,HNF4α免疫荧光结果显示,细胞内HNF4α总蛋白和细胞核内HNF4α蛋白表达明显升高。在给予药物治疗4周后,与模型组相比,黄连素高剂量组和黄癸固体分散体剂量组能够明显降低空腹血糖、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、血清和肝组织中mi R122的表达,胰岛素和高密度脂蛋白含量增加,此外,还能够抑制细胞内HNF4α总蛋白和细胞核内HNF4α的蛋白表达,抑制HNF4α核转位,并且在对给药后糖尿病小鼠肝脏组织的蛋白检测发现,黄连素能明显抑制糖异生关键酶(G6Pase和PEPCK)和脂质合成及代谢关键调控因子(SREBP-1/FAS/ACCα)的蛋白表达水平,促进CPT-1的蛋白表达,且黄连素高剂量组和黄癸固体分散体剂量组疗效相当,再次证明了1/4剂量的黄癸固体分散体即能达到同等黄连素剂量的治疗效果。其次,在体外实验中,我们通过棕榈酸刺激建立糖脂代谢紊乱的肝细胞模型,模拟体内脂质代谢紊乱,观察黄连素对HNF4α/mi R122的表达的影响,及脂质代谢关键蛋白(SREBP-1/FAS/ACCα/CPT-1)和调控肝糖异生关键蛋白(G6Pase/PEPCK)表达的影响,结果显示,在细胞水平上,黄连素能够明显降低细胞内HNF4α/mi R122的表达,纠正棕榈酸刺激引起的糖脂代谢紊乱。最后,我们在正常Hep G2细胞上通过对HNF4α基因过表达或沉默联合mi R122沉默及过表达干预,进一步观察了黄连素对HNF4α/mi R122,脂质代谢关键蛋白(SREBP-1/FAS/ACCα/CPT-1)以及调控肝糖异生关键蛋白(G6Pase/PEPCK)表达的影响,阐明黄连素可通过影响HNF4α/mi R122调节糖脂代谢紊乱,揭示了黄连素对糖脂代谢调控作用的直接分子靶点,为黄连素治疗糖尿病的临床应用提供了理论依据,研究结果显示,黄连素能够通过抑制HNF4?的表达进而调控肝脏糖异生和脂代谢关键蛋白的表达水平,且mi R122是HNF4?下游靶基因。