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目的自发性蛛网膜下腔出血(SAH)具有高致残率和高死亡率的临床特点。目前,SAH的神经功能障碍尚缺乏行之有效的治疗方法。观察SAH早期免疫炎症反应的变化,并应用新型免疫抑制剂芬戈莫德(Fingolimod)干预,探索SAH治疗的新途径。方法第一部分:于基因表达数据库(GEO)下载小鼠脑基底动脉基因芯片(GSE46696),使用微阵列分析假手术组(Sham组)和模型组(SAH组)样本各3份的基因变化,应用Cytoscape软件对差异表达基因进行功能分析、通路富集分析以及基因-基因互相作用分析。第二部分:假手术组(Sham组)和造模组(SAH组)小鼠各12只,分别于造模后1d、3d各选取6只小鼠应用流式细胞仪检测脑组织自然杀伤细胞(NK)、CD4+和CD25+内源性调节性T细胞(Treg),分别于造模后1d、3d各选取6只小鼠应用Western Blot检测脑组织免疫炎性因子,根据本论文第一部分分析结果,对相对显著的免疫炎性因子或炎症通路IL-1β、TNF-α、NF-κB和TLR4进行检测。第三部分:本部分实验分为假手术组(Sham组)、造模+生理盐水安慰剂组(SAH+Saline组)、造模+芬戈莫德治疗组(SAH+Fingolimod组),SAH+Fingolimod组于造模后2h、48h、72h分别给予Fingolimod(FTY720)腹腔注射,给药浓度为0.1mg/m L(按体重计算每只小鼠给药约200-230μg)。分别于3组中造模给药后第1d、3d抽取小鼠6只,应用流式细胞仪检测模型脑组织自然杀伤细胞(NK)、CD4+和CD25+内源性调节性T细胞;分别于3组中造模给药后第3d抽取小鼠6只,应用Western Blot检测模型脑组织炎症细胞因子或炎症通路IL-1β、TNF-α、NK-κB、TLR4;分别于3组中造模给药后第1d、3d、7d、14d抽取小鼠6只,检测脑组织水含量;分别于3组中造模给药后第1d、3d、7d、14d抽取小鼠6只,自鼠尾静脉注入2%伊文蓝(EB)溶液,检测脑组织EB含量;分别于3组中造模给药后第1d、3d、7d、10d、14d抽取小鼠6只,应用mNNS评分和Morris水迷宫实验,进行小鼠神经功能评估。结果第一部分:小鼠SAH模型脑基底动脉的基因芯片及免疫炎症因子的功能分析,可以发现在SAH早期免疫炎症反应有可能是导致预后不良的重要原因,其中IL-1β、TNF-α等炎症因子和NF-κB、TLR4等炎症通路的显著变化有可能是SAH早期脑损伤(EBI)严重程度的敏感标志之一。第二部分:SAH造模后早期NK细胞/CD3+T细胞的百分比明显增高,与Sham组比较,差异具有统计学意义(均P<0.05);SAH组CD4+和Foxp3+T细胞与CD4+T细胞计数的比例,与Sham组比较,略有升高,差异无统计学意义(均P>0.05);Western Blot检测脑组织免疫炎性因子或通路IL-1β、TNF-α、NF-κB和TLR4与β-action蛋白的比例明显升高,与Sham组比较,差异具有统计学意义(均P<0.05)。第三部分:SAH早期,SAH+Saline组和SAH+Fingolimod组NK细胞、CD3+T细胞计数高于Sham组,SAH+Fingolimod组低于SAH+Saline组,差异具有统计学意义(均P<0.05);SAH+Fingolimod组CD4+和Foxp3+T细胞计数高于SAH+Saline组,差异具有统计学意义(均P<0.05);SAH+Fingolimod组IL-1β、TNF-α、NF-κB和TLR4表达均低于同时间点SAH组,SAH+Fingolimod组炎性因子或通路的蛋白表达与β-action蛋白的比例均低于同时间点SAH组比较,差异具有统计学意义(均P<0.05);第3d、7d检测SAH+Fingolimod组脑组织水含量明显低于SAH+Saline组,差异有统计学意义(均P<0.05);第3d、7d检测SAH+Fingolimod组脑组织EB含量明显低于SAH+Saline组,差异有统计学意义(均P<0.05);自第3d起SAH+Fingolimod组mNSS评分明显低于SAH+Saline组,差异有统计学意义(P<0.05);应用Morris水迷宫评价,SAH+Fingolimod组认知功能改善情况明显好于SAH+Saline组,获得性训练和对位性训练指标比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论SAH后发生的EBI是多种途径的病理生理变化,对脑组织的损伤非常严重,继而出现的CVS更是加重了脑损伤的程度。免疫炎症反应越来越得到关注与重视,直接影响预后,通过本实验可以初步判定免疫炎症变化是SAH早期脑损伤的重要因素,免疫细胞和炎症因子在脑损伤及修复过程中发挥了重要的作用。这为进一步有针对性的研究和探索SAH早期治疗的药物和方式提供了方向。SAH后出现的免疫炎症反应影响其预后,EBI阶段是治疗干预SAH继发性脑损伤的关键时间段。Fingolimod是一种新型的免疫抑制剂,能够有效的调控免疫功能,降低NK细胞比例水平,升高Treg细胞水平,减轻炎症损伤作用,有助于促进SAH后脑损伤修复,改善BBB通透性,改善SAH预后,这为今后SAH早期药物调控治疗开辟了新的途径,为临床POC研究实施做好基础实验准备,这必将带来前所未有的临床意义和社会效益。SAH早期发生的免疫炎症反应是导致其不良预后的重要原因。新型免疫抑制剂Fingolimod通过调控NK细胞、Treg细胞水平和IL-1β、TNF-α、NF-κB和TLR4等炎症因子或炎症通路变化,干预SAH后EBI期间的病生理反应,缓解CVS的程度,改善SAH预后,为SAH早期药物治疗开辟了新的思路。