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注意力缺陷多动障碍(Attention Deficit Hyperactivity Disorder,ADHD)又称儿童多动综合征,是儿童时期常见的神经精神障碍性疾病之一,其核心症状为注意力不集中、活动过度和情绪冲动。根据其典型表现可将该病分为冲动多动型、注意力缺陷型以及混合型3类。该病对患儿的学业、人际关系、社会生活等诸多方面产生了消极的影响,同时给患儿及其家庭乃至全社会带来沉重的负担。因此,积极有效的治疗措施是极为重要的。ADHD具有病程长,易反复的特点。导师致力于对该病的基础及临床研究,总结多年临床经验,认为本病病机总属阴阳失衡,五脏失调。结合ADHD症状多以“躁、动”为主的特点,认为此病躁与动的产生,究其根本为阴静不足,阳动亢盛,故本病的根本为阴虚阳亢。创“益气养阴”法,运用自拟方“静宁颗粒”治疗该病,临床上取得了良好的疗效,是治疗气阴两虚型多动症的临床有效验方。并在前期实验和临床研究基础上取得了一定进展。结合当下神经递质失衡学说热点,探讨该方治疗ADHD的作用机制,并挖掘其在改善ADHD患儿症状的作用靶点。本研究包括临床与实验两部分。实验又分为两部分:(1)对于SHR大鼠DA受体D1、D2的研究包括:ELAISA法检测大鼠前额叶,纹状体中多巴胺(DA)含量,Western b1ot方法检测纹状体D1、D2类受体的表达水平。(2)对于SHR大鼠DA信号通路AC/cAMP/PKA信号通路的研究包括:ELAISA法检测大鼠纹状体中cAMP的含量,Western blot方法检测纹状体中PKA的蛋白水平。临床研究:静宁颗粒治疗注意力缺陷多动障碍气阴两虚型患儿的临床疗效及安全性评价目的:1.通过比较静宁颗粒治疗注意力缺陷多动障碍气阴两虚型患儿SNAP-IV量表前后的积分变化,并与口服托莫西汀进行对照比较,评价静宁颗粒治疗ADHD的临床疗效。2.通过观察静宁颗粒治疗注意力缺陷多动障碍气阴两虚型患儿Conners评分量表前后的积分变化,并与口服托莫西汀进行对照比较,分别评价静宁颗粒治疗ADHD不同行为问题的疗效。方法:根据用药方案的不同,将东直门医院儿科就诊的注意力缺陷多动障碍(气阴两虚型)患儿30例设为中药组,将北京大学第六医院儿科门诊收集的注意力缺陷多动障碍患儿30例设置为西药对照组,每组各30例。治疗组口服中药静宁颗粒,对照组服用托莫西汀治疗,疗程均为12周,观察结束后,对比治疗前后患儿注意力缺陷多动障碍量表(SNAP-Ⅳ)以及Conners父母问卷评分。并于用药前后分别进行血常规、尿常规、肝功能、肾功能的检查。并对治疗期间出现的不良反应进行随访记录。结果:对比两组患儿临床治疗效果,在SNAP-Ⅳ量表比较中,中药组和西药组均提示疗后较疗前对比差异有统计学意义;而中药组和西药组疗后对比无统计学意义。Conners量表中,中药组提示在行为问题、学习问题和多动问题方面,疗后较疗前有统计学意义;西药组在改善行为问题、学习问题、躯体问题和多动问题方面疗后较疗前对比差异有统计学意义。两组疗后对比无统计学意义。两组患儿在服用静宁配方颗粒和托莫西汀期间,血、尿、肝(ALT)、肾(BUN、Cr)功能检查等安全性指标均在正常参考值范围内,均无严重的不良反应情况发生。结论:静宁配方颗粒能够有效地改善气阴两虚多动症患儿的临床核心症状,改善患儿SNAP-Ⅳ量表积分,及Conners父母量表评分,其临床疗效与托莫西汀相当,且静宁颗粒对ADHD气阴两虚型患儿的干预无明显不良反应,药效安全。实验一:静宁颗粒对ADHD大鼠DA含量及其D1、D2受体家族的调节作用目的:采用跳台实验观察自发性高血压大鼠(SHR)的学习与记忆能力,评价SHR大鼠作为ADHD模型大鼠的可行性。评价静宁颗粒对SHR大鼠认知功能的影响,并观察静宁配方颗粒对SHR大鼠纹状体中多巴胺及其受体含量的影响。方法:50只雄性SHR大鼠饲养于屏障环境中,适应性喂养3天后,称重、编号,按照随机数字表法随机分为5组,分别为模型组、静宁高、中、低剂量组、盐酸托莫西汀组,每组10只。并将10只同龄Wistar大鼠设为正常对照组。分组灌胃,中药组按高、中、低给药剂量以蒸馏水配制静宁颗粒,给药量分别为高剂量23.14g/kg、中剂量11.57g/kg、低剂量5.785g/kg,西药组予盐酸托莫西汀胶囊,用量为5.36mg/kg。模型组及正常组予等量蒸馏水灌胃。各组每天灌胃1次,连续治疗6周,第6周进行跳台实验,行为学观察结束后处死取材。ELAISA法检测大鼠前额叶,纹状体中多巴胺含量,Western blot方法检测纹状体D1、D2类受体的表达水平。结果:行为学检测方面,模型组与空白对照组比较,模型组小鼠跳下平台的潜伏期明显缩短(P<0.01);各给药组逃避潜伏期较模型组延长,但结果比较无统计学意义(P>0.05);各给药组逃避潜伏期均较空白组明显缩短,且除中药中剂量组外其余各组与空白组比较,结果均有统计学意义(P<0.05);其中西药组潜伏期比中药各组略短,但差异不明显(P>0.05)。模型组错误次数高于空白组,差异有显著统计学意义(P<0.01);各给药组与模型组比较错误次数显著减少,且除中药高剂量组外其余各给药组较模型组比较差异均有统计学意义(P<0.05);各给药组错误次数略多于空白组,除中药高剂量组外,其余各组与空白组差异无统计学意义(P>0.05);中药各组与西药组比较错误次数无明显差异(P>0.05)。神经递质检测中,模型组前额叶DA含量明显低于空白组,差异有显著统计学意义(P<0.01);各给药组前额叶DA含量均高于模型组,但差异无统计学意义(P>0.05);各给药组前额叶DA含量均低于空白组,除西药组外其余各组与空白组比较差异均有统计学意义(P<0.01);中药各组前额叶DA含量均低于西药组,但差异无统计学意义(P>0.05);模型组前额叶纹状体DA含量明显低于空白组,差异有显著统计学意义(P<0.01);各给药组纹状体DA含量均高于模型组,且除中药高剂量组外,其余各组与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05);各给药组纹状体DA含量均低于空白组,但除中药高剂量组外其余各组与空白组比较差异无统计学意义(P>0.05);中药各组纹状体DA含量与西药组比较无显著差异(P>0.05);受体比值结果提示,模型组D2/D1小于空白组,差异有显著统计学意义(P<0.01);各给药组D2/D1均略大于模型组,其中西药组与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05),其余各给药组与模型比较差异无统计学意义(P>0.05);各给药组D2/D1均小于空白,其中中药中剂量组与空白组比较差异有显著统计学意(P<0.01),其余各组与空白组比较差异均无统计学意义(P>0.05);西药组D2/D1略高于中药各组,差异无统计学意义(P>0.05);结论:1、SHR大鼠是较为理想的ADHD动物模型,从行为学及病理学均有证据证明其与ADHD模型具有高度的一致性;2、静宁颗粒可有效增强SHR大鼠的学习记忆能力。3、ADHD模型鼠纹状体及前额叶中DA含量减少,且D1及D2类受体均不足,静宁配方颗粒可以有效提7高DA及其受体含量。4、ADHD大鼠存在D1受体功能亢进的情况,这可能是引起ADHD最主要的原因。静宁颗粒可能是通过缓解这种亢进的趋势,而有效治疗ADHD的。实验二:静宁颗粒对ADHD大鼠AC/cAMP/PKA信号通路的影响目的:观察静宁配方颗粒对ADHD模型鼠纹状体内cAMP、PKA的干预作用。方法:同前。结果:模型组纹状体内cAMP明显高于空白对照组,差异有显著统计学意义(P<0.01);各给药组纹状体cAMP较模型组低,其中西药组cAMP含量远低于模型组,差异有显著统计学意义(P<0.01);中药高剂量组cAMP含量明显低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);中药低剂量组及中药中剂量组,cAMP含量虽低于模型组,但不明显,差异无统计学意义(P>0.05);各给药组纹状体cAMP含量,均低于空白对照组,中药低、中剂量组差异较大,差异有显著统计学意义(P<0.01);西药组及中药高剂量组与空白组比较差异不明显,差异无统计学意义(P>0.05);给药后,西药组cAMP含量与空白对照组最接近。中、低计量组cAMP明显高于西药组,差异有统计学意义(P<0.05);高剂量组cAMP含量高于西药组,但差异不明显,比较无统计学意义(P>0.05)。纹状体中PKA结果:模型组纹状体内PKA明显高于空白对照组,差异有显著统计学意义(P<0.01);各给药组纹状体PKA与模型组比较,均低于模型组,但差异无统计学意义(P>0.05);各给药组纹状体PKA含量均高于空白对照组,但差异不明显,比较无统计学意义(P>0.05);各给药组之间无明显差异,各组间比较差异均无统计学意义(P>0.05);结论:1、ADHD模型鼠存在D1受体功能亢进以及纹状体AC/cAMP/PKA信号通路异常兴奋,靶蛋白PKA存在和生成过多的情况,这可能是引起ADHD患儿多动、冲动的最主要的原因。2、静宁颗粒可能是通过缓解这种亢进的趋势,有效降低纹状体AC/cAMP/PKA信号通路的兴奋性,进而减少靶蛋白PKA的合成,从而达到治疗ADHD的目的