基质金属蛋白酶MMP-26在原核和真核细胞中的表达研究

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基质金属蛋白酶是降解细胞外基质成分最重要的酶之一,是由细胞分泌的Zn2+金属内肽酶的总称,它们广泛地分布于动植物界,几乎能降解所有的构成生物体内环境细胞外基质的成分。在正常和病理情况下,MMPs具有广泛的蛋白水解作用。在肿瘤的发生和发展过程中,MMPs常过度表达,降解基底膜和细胞外基质,促进肿瘤的侵袭、转移及血管新生。因此,以MMPs作为治疗靶点,设计并寻找针对MMPs的拮抗药物,尤其是寻找可以选择抑制MMPs的药物是近年来肿瘤治疗的热点。MMP-26是MMPs家族的新成员,2001年首次被发现并克隆成功。在此基础上,我们成功的在体外利用MMP-26的原核表达系统进行了表达。利用阴离子交换层析法对表达的包涵体进行纯化,并得到单一产物,采用透析复性方法对MMP-26进行复性,结果得到了高活性的MMP-26成熟形式,并检测其中间体形式。为了进一步研究MMP-26在生理条件下的真实表达形式,我们又进行了真核表达载体pcDNA3.1-MMP26-MYC的构建,并将其转入真核哺乳动物细胞COS-7中,通过G418筛选稳定表达MMP-26的单克隆细胞,利用Western-blotting和RT-PCR、免疫细胞化学等方法进行检测,最终成功获得了MMP-26稳定转染的单克隆细胞。这些工作为进一步研究MMP-26的功能和结构奠定了基础。
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