赤水金钗石斛治疗糖尿病视网膜病变的疗效研究

来源 :遵义医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ccbeilu
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糖尿病视网膜病变(Diabetic retinopathy,DR)是指一种由糖尿病患者体内长期持续存在的高糖环境引起的进行性的视网膜血管受损、炎症形成和血管生成为显著特征之一的临床并发症,流行病学调查显示炎症和微血管病变主要在其发病机制中起作用,而核因子-κ蛋白B(Nuclear factor-κB,NF-κB)通路又能起到影响炎症调控的作用。贵州金钗石斛(Dendrobium nobile Lindl.,DNL)是在《中国药典》历版均收载在册的一种珍稀中药材,研究显示DNL多个组分均可降低炎症因子的表达,但服用DNL干粉是否会对糖尿病视网膜病变起积极作用鲜有报道,因此本研究将从动物实验和临床研究两个方面对其进行研究。第一部分:通过对SD雄性大鼠建立一组糖尿病视网膜病变动物模型,用DNL灌胃治疗后检测其血糖指数及体重,还进一步检测炎症因子如肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达用以判断其是否可能减轻其眼部炎症反应,同时直接检测NF-κB/NLRP3通路上相关蛋白和基因如白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、Caspase-1等的表达,闪光视网膜电图检测其视网膜功能改变情况;第二部分:通过临床寻找早期糖尿病视网膜病变患者(小于等于2期),充分告知并结合患者意愿后给予部分患者口服DNL干粉后,ELISA法检测血液中炎症因子含量和进行临床眼科专科影像学检查以确定DNL干粉是否能有效抑制视网膜炎症反应进程并探究NF-κB/NLRP3信号通路是否能在其中发挥作用。第一部分金钗石斛干粉对早期糖尿病视网膜病变患者黄斑结构与功能的影响目的:探讨口服DNL干粉是否可改善早期糖尿病视网膜病变患者视功能及黄斑区微循环。方法:将就诊于遵义医科大学附属医院眼科和内分泌科确诊为早期糖尿病视网膜病变的患者充分告知并结合患者意愿后分为两组:实验组(给予DNL干粉不间断口服2月,15例30眼,一日两次,每次2g)、对照组(未给予任何干预眼底改变药物,15例30眼),每月检测患者空腹血糖、糖化血红蛋白(Hb A1C)、肝功、肾功、胰岛功能激素改变,ELISA检测患者血液中IL-1β、VEGF含量,观察患者最佳矫正视力(BCVA)、眼压(IOP)、OCT检查中脉络膜厚度变化、OCTA检查中FAZ面积、周长和形态指数变化、FFA检查视网膜微血管变化、mf ERG检查视功能变化。结果:实验组与2月前比较,BCVA、眼压无明显改变(p>0.05);OCT检查EDI-OCT模式下实验组脉络膜厚度增厚(p<0.05);OCTA检查实验组FAZ面积减小、周长变小、形态指数趋近于1(p<0.05);mf ERG检查实验组中央峰高度增高,ELISA结果中IL-1β降低(p>0.05)、VEGF降低(p<0.05);对照组与2月前比较,BCVA、眼压无明显改变(p>0.05);OCT检查脉络膜呈逐渐变薄趋势(p<0.05);OCTA检查FAZ面积增大、周长变大、形态指数变小(p<0.05);mf ERG检查中央峰无明显改变。结论:服用DNL干粉可以改善早期糖尿病视网膜病变患者视功能、黄斑区微循环,增加脉络膜厚度。第二部分金钗石斛干粉对糖尿病视网膜病变大鼠模型炎症反应的抑制作用目的:探究灌胃DNL干粉对糖尿病视网膜病变大鼠模型的炎症反应抑制作用及NF-κB/NLRP3信号通路的影响。方法:给予75只雄性Sprague-Dawley大鼠高脂高糖饲料喂养4周后,于腹腔内注射链脲佐菌素(STZ)35mg/kg为建立2型糖尿病大鼠模型,而后恢复普通饲料喂养4周后行FFA检查观察其眼底改变。将其随机分为5组:对照组(CMC-Na)、模型组(CMC-Na)、DNL低剂量组(50mg/kg)、中剂量组(100mg/kg)、高剂量组(200mg/kg),每组15只,每组分别灌胃4周、8周、12周后随机处死5只。通过RT-PCR检测视网膜组织中存在的炎症因子NF-κB、NLRP3 m RNA表达确定有效治疗时间及有效治疗剂量。后期喂养24只SD大鼠,再使用上述同样的建模方法建立16只糖尿病模型,随机选择8只给予有效治疗方案的金钗石斛干预。通过RT-PCR检测视网膜组织中存在的炎症因子VEGF、TNF-α、NF-κB、NLRP3 m RNA表达;蛋白质印迹法主要检测视网膜组织中VEGF、TNF-α、NF-κB/NLRP3通路相关蛋白的表达;闪光视网膜电图(F-ERG)检测大鼠a波、b波振幅。结果:高脂高糖饲料连续不间断喂养4周+小剂量STZ腹腔注射法可得到血糖稳定且大于等于16.7mmol/L的糖尿病大鼠,再继续普通饲料喂养4周后可发现眼底有早期糖网样改变的糖尿病视网膜病变模型大鼠;与对照组相比,糖尿病模型组血糖均升高(p<0.05)、体重均下降(p<0.05),b波振幅下降(p<0.05)、模型组内VEGF、TNF-α、NF-κB、NLRP3 m RNA表达均增加(p<0.05),Caspase-1、VEGF、NLRP3、TNF-α、IL-1β、p NF-κB p65蛋白表达均增加(p<0.05),而NF-κB p65蛋白表达无明显统计学意义(p>0.05);与模型组相比,DNL各个剂量组VEGF、TNF-α、NF-κB、NLRP3 m RNA表达均降低(p<0.05),且高剂量、12周时降低最明显,VEGF、TNF-α、p NF-κB p65、NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白表达均降低(p<0.05),且高剂量、12周时降低最明显,且b波振幅较为升高((p<0.05),而a波振幅、NF-κB p65蛋白表达在三组间均无明显统计学意义(p>0.05)。结论:DNL干粉抑制早期糖尿病视网膜病变模型大鼠炎症反应进展,且本实验中有效治疗剂量为200mg/kg、有效治疗时间为12周;DNL可抑制大鼠视网膜组织NF-κB/NLRP3信号通路。
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