刺五加是东北地区一味重要的中草药,现阶段刺五加内生菌研究内容为内生菌分离鉴定和代谢产物的生物活性研究两个方面,从刺五加植株中分离出的内生菌产生的次级代谢产物具有广谱抗菌活性,并且内生菌能够明显提高刺五加药用活性物质的产量,现阶段关于刺五加内生微生物菌群落解析的报道较为少见。本研究采用高通量测序技术对刺五加内生微生物菌群落进行解析,实验材料采自黑龙江省帽儿山、黑龙江省小兴安岭、吉林省长白山三个地理区域,分别对三个地区的刺五加根部进行预处理后提取DNA,检测提取样品中所含有的细菌和真菌序列,然后在不同分类水平上比较三个地区刺五加根部微生物群落差异性。对小兴安岭地区同一株刺五加的根、茎、果实进行内生菌群落分析,比较各样品内生菌的差异性。研究发现帽儿山、小兴安岭、长白山三个地区刺五加根部内生真菌主要是Sordariomycetes、Tremellom-ycetes、Dothideomycetes真菌,其中Fibulorhizoctonia、Phialocephala、Russula等真菌是小兴安岭地区刺五加根部特有的内生真菌,这表明在不同地区刺五加根部的内生真菌存在差异性。在小兴安岭同一株刺五加的茎中,Sordariomycetes真菌占据了79.80%的比例,在果实样品中发现Tremellomycetes真菌占据了整个真菌数量的51.16%,根部由于土壤环境稳定,内生真菌分布均匀。表明同一个地区刺五加虽然在真菌的种类上相似,但是各部位的真菌比例不同,取决于真菌所处的每个部位微环境的不同。在对三个地区刺五加根部内生细菌群落研究发现:Erwinia作为一种植物致病菌在帽儿山和小兴安岭地区刺五加根部分布广泛且数量稳定,但长白山地区刺五加根部Erwinia数量极少,表明长白山地区刺五加植株对Erwinia感染具有一定的免疫能力,这对刺五加人工栽培具有重要指导意义。在对同一株刺五加不同部位内生细菌群落研究中发现Enterobacteriaceae在果实中大量存在,根部数量为29.7%,在茎中含量仅有6.8%,表明Enterobacteriaceae可能随刺五加果实繁殖一起遗传到下一代。采用环境相关性分析对三个地区气候特征与内生菌分布的关系进行分析,发现影响三个地区刺五加内生菌分布差异性的主要因素是海拔高度;对小兴安岭地区刺五加不同部位内生菌分析发现,影响小兴安岭地区同一株刺五加不同部位内生菌分布差异性的主要因素是光照强度,这表明刺五加内生菌的分布与所在地区的气候存在相关性,其中刺五加内生细菌的分布与刺五加所处地区的气候相关性较大,而内生真菌的分布受到多种条件影响,因此刺五加内生细菌的分布更能反映刺五加所处地区的气候环境。研究提出一种新的内生微生物分离思路,先对样品进行测序得到相应微生物群落基本信息再进行分菌,这样能够有目的去筛选目标内生菌。本研究分别对刺五加内生真菌和细菌进行分离,对分离出的内生细菌进行16Sr DNA序列比对发现,其中Pantoea cypripedii、Pseudomonas marginalis、Pseudomonas sp.三株细菌是在高通量测序中检测到的;对所分离的内生真菌进行ITS测序后,利用NCBI对比库进行比对发现,Phialocephala、Gibberella.avenacea、Hypocreavirens三个真菌同样出现在454高通量测序中,表明这种思路是可行性的。