论文部分内容阅读
目的:Bietti结晶样视网膜色素变性。ietti crystalline comeoretinal dystrophy,BCD)是一种W视网膜结晶和视网膜色素上皮萎缩为特征的罕见常染色体单基因隐性遗传性视网膜变性疾病。己证实CF鲜。基因突变是导致BCD的原因。本研巧旨在分析鉴定5个中国BCD家系的CZP4F2基因突变W及患者的临床特征。方法:对所有患者进行详细眼科学检查。采集患者外周血血样并提取基因组DNA。通过聚合酶链式反应对CyP4F2基因的所有外显子和外显子内含子交界区域序列进行扩增,并通过DNA直接测序技术检测突变位点。同时对100条对照染色体进行基因突变检测1^^排除非致病性基因多态位点。结果:眼底检查发现所有患者眼底后极部均存在细小黄色结晶和视网膜色素上皮萎缩,一例患者并发脉络膜新生血管。共检出5种不同CyP4松基因突变位点,包括两个错义突变（P.F73L,P.R400H）,2个剪切位点突变（c.802-8810dell7insGC,c.l091-2A>G）和1个单碱基对缺失突变（p.T479TfsX7orc.l437delC）,其中3例患者中均检出送2个剪切位点突变。突变位点p.T479TfsX7是首次报道的新发突变位点,在100条正常对照染色体中未检出。结论:剪切位点突变c.802-8810d过17insGC和c.l091-2A>G是中国BCD患者常见突变。本研巧结果扩展了Bietti结晶样视网膜色素变性的等位基因异质性。目的:人类公公S77基因突变与至少4种不同的视网膜变性疾病相关,它们被统称为B的煽,包括:B的t卵黄样黄斑营养不良（B VMD）,常染色体隐性遗传Best病（ARB）,成人型卵黄样黄斑营养不良和常染色体显性遗传玻璃体视网膜脉络膜病变。本研究的目的是对中国人群中Bes偏患者的公啟77基因突变进行分析并描述这些患者的临床特征。方法;本研究共纳入来自12个无关中国家系的13例Best病患者。对送些患者进巧详细临床检查,包括最佳矫正视力、裂隙灯检查、眼底检查和彩照、光学相干断层扫描、眼底自发英光检查、视网膜电流图检查和眼电生理检查。采集受试者血样并提取基因组DNA,通过直接测序方法对公怎义口基因突变进行分析。同时对100条对照染色体进行基因突变检测W排除非致病性基因多态位点。结果:7例患者表现为BVMD表型,并携带与常染色体显性遗传相符的度扮77基因杂合突变。在这些患着中共检出2个化閒77基因新发突变位点（p.T4I,p.A291V）和3个己报道突变位点（P.R218C,P.Q293H,P.D301G）。6例患者携带与常染色体隐性遗传相符的公妨77基因双突变,其中4例BVMD表型患者携带公ES77基因杂合双突变,2例ARB表型患者携带公ES77基因纯合双突变。在这些患者中共检出8个公広S77基因突变位点,包括4个新发突变位点（P.Y33H,P.R130L,P.M163民,c.519delA）和4个己报道突变位点（P.民13圧P.A195V,P.R255W,P.W287*）。结论:携带公勘77基因双突变的患者在中国Best病患者中常见,其临床表型具有一定异质性。公広S77基因突变位点的不同巧质、不同组合W及非等位基因的上位效应均可能影响患者表型。本研究结果拓展了公広SJ7基因的突变谱。目的:常染色体隐目的：Bietti结晶样视网膜色素变性（Bietti crystalline corneoretinal dystrophy, BCD）是一种以视网膜结晶和视网膜色素上皮萎缩为特征的罕见常染色体单基因隐性遗传性视网膜变性疾病。已证实CYP4V2基因突变是导致BCD的原因。本研究旨在分析鉴定5个中国BCD家系的CYP4V2基因突变以及患者的临床特征。方法：对所有患者进行详细眼科学检查。采集患者外周血血样并提取基因组DNA。通过聚合酶链式反应对CYP4V2基因的所有外显子和外显子内含子交界区域序列进行扩增,并通过DNA直接测序技术检测突变位点。同时对100条对照染色体进行基因突变检测以排除非致病性基因多态位点。结果：眼底检查发现所有患者眼底后极部均存在细小黄色结晶和视网膜色素上皮萎缩,一例患者并发脉络膜新生血管。共检出5种不同CYP4V2基因突变位点,包括两个错义突变（p.F73L,p.R400H）,2个剪切位点突变（c.802-8810del17insGC, c.1091-2A>G）和1个单碱基对缺失突变（p.T479TfsX7 or c.1437delC）,其中3例患者中均检出这2个剪切位点突变。突变位点p.T479TfsX7是首次报道的新发突变位点,在100条正常对照染色体中未检出。结论：剪切位点突变c.802-8810del17insGC和c.1091-2A>G是中国BCD患者常见突变。本研究结果扩展了Bietti结晶样视网膜色素变性的等位基因异质性。目的：人类BEST1基因突变与至少4种不同的视网膜变性疾病相关,它们被统称为Best病,包括：Best卵黄样黄斑营养不良（BVMD）,常染色体隐性遗传Best病（ARB）,成人型卵黄样黄斑营养不良和常染色体显性遗传玻璃体视网膜脉络膜病变。本研究的目的是对中国人群中Best病患者的BEST1基因突变进行分析并描述这些患者的临床特征。方法：本研究共纳入来自12个无关中国家系的13例Best病患者。对这些患者进行详细临床检查,包括最佳矫正视力、裂隙灯检查、眼底检查和彩照、光学相干断层扫描、眼底自发荧光检查、视网膜电流图检查和眼电生理检查。采集受试者血样并提取基因组DNA,通过直接测序方法对BEST1基因突变进行分析。同时对100条对照染色体进行基因突变检测以排除非致病性基因多态位点。结果：7例患者表现为BVMD表型,并携带与常染色体显性遗传相符的BEST1基因杂合突变。在这些患者中共检出2个BEST1基因新发突变位点（p.T4I,p.A291V）和3个已报道突变位点（p.R218C, p.Q293H, p.D301G）.6例患者携带与常染色体隐性遗传相符的BEST1基因双突变,其中4例BVMD表型患者携带BEST1基因杂合双突变,2例ARB表型患者携带BEST1基因纯合双突变。在这些患者中共检出8个BEST1基因突变位点,包括4个新发突变位点（p.Y33H, p.R130L, p.M163R, c.519delA）和4个已报道突变位点（p.R13H, p.A195V, p.R255W, p.W287*）结论：携带BEST1基因双突变的患者在中国Best病患者中常见,其临床表型具有一定异质性。BEST1基因突变位点的不同性质、不同组合以及非等位基因的上位效应均可能影响患者表型。本研究结果拓展了BEST1基因的突变谱。目的：常染色体隐性遗传Best病（ARB）与双杂合或纯合BEST1基因突变有关,是一种与典型卵黄样黄斑营养不良（BVMD）临床表现不同的疾病。本研究的目的在于通过研究第二部分所检出的与ARB相关的BEST1基因新发错义突变位点p.R130L和p.M163R编码突变型蛋白的细胞定位和稳定性,对其功能及致病机制进行初步探讨。方法：在野生型BEST1基因真核表达载体BEST1-pCMV6的基础上,利用定点诱变技术,构建p.R130L和p.M163R突变型BEST1基因真核表达载体。体外培养MDCKⅡ （Madin-Darby canine kidney II）细胞,将野生型以及突变型BEST1基因真核表达载体分别转染至MDCKⅡ细胞,经免疫荧光染色,激光扫描共聚焦显微镜观察比较野生型以及突变型蛋白在MDCKⅡ细胞中的表达和分布。同时将溶酶体抑制剂或蛋白酶体抑制剂与MDCKⅡ细胞共同孵育,细胞裂解产物进行Western blot检测,对野生型以及突变型蛋白的稳定性进行评估。结果：成功构建突变型BEST1基因真核表达载体,体外转染至MDCKⅡ细胞后,野生型hBestl蛋白和突变型蛋白hBest1R130L主要分布于细胞膜,而突变型蛋白hBest1M163R则主要分布于胞浆中。突变型蛋白hBest1M163R可被蛋白酶体快速降解,溶酶体抑制剂对于突变型蛋白hBest1R130L和hBest1M163R的降解无显著影响。结论：突变型蛋白hBest1M163R加工折叠和细胞定位错误是导致发病的分子机制。不同致病机制的突变型蛋白可导致同一临床表型。对于BEST1基因突变位点致病机制的研究有助于加深对于ARB病理机制的理解。性遗传Best病（ARJB）与双杂合或纯合公基因突变有关,是一种与典型卵黄样黄斑营养不良（BVMD）临床表现不同的疾病。本研巧的目的在于通过研巧第二部分所检出的与ARB相关的公掛T/基因新发措义突变位点P义130L和P.M163民编码突变型蛋白的细胞定位和稳定性,对其功能及致病机制进行初步探讨。方法:在野生型公邸77基因真核表达载体化閒77-PCMV6的基础上,利用定点诱变技术,构建P.R130L和P.M163R突变型公做77基因真核表达载体。体外培养MDCKII（Madin-Darby canine kidn巧II）细胞,将野生型W及突变型公尼S7V基因真核表达载体分别转染至MDCKII细胞,经免疫巧光染色,激光扫描共聚焦显微镜观察比较野生型W及突变型蛋白在MDCKII细胞中的表达和分布。同时将溶酶体抑制剂或蛋白酶体抑制剂与MDCKII细胞共同解育,细胞裂解产物进行Western blot检测,对野生型W及突变型蛋白的稳定性进行评估。结果:成功构建突变型S城77基因真核表达载体,体外转染至MDCKII细胞后,野生型hBestl蛋白和突变型蛋白hBestlKiwL主要分布于细胞膜,而突变型蛋白陆estlMiMK则主要分布于胞浆中。突变型蛋白姐estlMiwK可被蛋白酶体快速降解,溶酶体抑制剂对于突变型蛋白hBestlKiwt和hfiestlMWK的降解无显著影响。结论:突变型蛋白hBestlMiwK加工折叠和细胞定位错误是导致发病的分子机制。不同致病机制的突变型蛋白可导致同一临床表型。对于基因突变位点致病机制的研究有助于加深对于ARB病理机制的理解。