西洋参皂苷和多糖的活性研究

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西洋参(Panax quenquifolium. L)作为名贵中药在我国已有300年的使用历史。对西洋参在神经系统、心血管系统、内分泌系统及癌症的作用方面研究和报道较多,但目前缺乏对西洋参皂苷的抑菌作用及多糖免疫作用的系统研究。本文分别对西洋参皂苷和多糖进行了系统的分离纯化,进而研究了皂苷种类和纯度对抗氧化和抑菌作用影响及多糖在分离纯化过程中对巨噬细胞Raw264.7的免疫调节作用的变化。干燥的西洋参根经过70%乙醇提取得总皂苷TAG,HPLC分析含有皂苷种类为Rg1, Re, Rb1,Rc, Rb2, Rd和Gyp XVII,TAG经AB-8大孔吸附树脂纯化得总皂苷含量为52.15±0.61mg/100mg的ABG,TAG经HP-20纯化后得总皂苷含量分别为39.29±0.73mg/100mg和69.71±0.74mg/g的HPG1和HPG2,ABG和HPG1经130°C4h加热处理和AB-8纯化后得总皂苷含量分别为90.89±1.14mg/100mg和91.35±1.23mg/100mg的ABHG和HPHG。HPLC-MS显示热处理后出现新的皂苷类型20(S)/(R)-Rg2,20(S)/(R)-Rg3, Rg6/F4,20(S)/(R)-Rs3和Rg5/Rk1。总多酚在纯化成分中含量减少但在加热后成分中又升高。DPPH抗氧化活性以TAG最强。ABTS抗氧化性以HPHG最强。ORAC抗氧化活性以HPHG和ABHG最强。在抑菌活性测定中,只有HPHG表现出对2种痤疮丙酸菌株较强抑制作用,且具有量效关系,在1mg/disk,对ATCC11827和ATCC6919的抑菌圈分别达到13.0±0.06和22.5±0.5mm;MIC分别为128μg/mL和64μg/mL,MBC分别为128μg/mL和64μg/mL。提取皂苷后的药渣经过100°C热水煮提、α-淀粉酶酶解淀粉,Sevag试剂除蛋白、50%及80%乙醇沉淀,得到西洋参水溶性多糖PPQ1和PPQ2。PPQ1经DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析分别得水洗多糖PPQ1.1和盐洗多糖PPQ1.2,同法纯化PPQ2得水洗多糖PPQ2.1、盐洗多糖PPQ2.2和PPQ2.3。PPQ1.2经Sephacryl S-300HR凝胶过滤层析纯化后得到2种分子质量分别为9.7×10~5Da和2.3×10~4Da的纯多糖PPQ1.2.1和PPQ1.2.2;同法纯化PPQ2.2得到2种分子质量分别为1.2×10~5Da和5.3×10~3Da的纯多糖PPQ2.2.2和PPQ2.2.3。多糖免疫调节活性研究结果显示,粗多糖PPQ1和PPQ2,以及盐洗多糖PPQ1.2、PPQ2.2、PPQ2.3均能显著上调Raw264.7细胞NO、TNF-α、IL-6、IL-10、IL-1β的生成又能显著抑制LPS诱导细胞NO、TNF-α、IL-6、IL-10的过量产生。水洗多糖PPQ1.1和PPQ2.1在上调细胞NO、TNF-α、IL-6、IL-10、IL-1β生成方面与空白对照组无显著差异,但在抑制LPS诱导细胞NO、TNF-α、IL-6过量产生方面与LPS模型组有显著差异。表明PPQ1、PPQ2、PPQ1.2、PPQ2.2、PPQ2.3既具有免疫上调作用又具有抗炎作用,PPQ1.1和PPQ2.1无明显免疫上调作用但具有一定的抗炎作用。
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