论文部分内容阅读
【研究目的】本实验旨在研究人参皂甙Rg1对ConA诱导肝损伤小鼠是否有保护作用并探讨其可能的作用机制。【研究方法】1.将C57BL健康雄性小鼠随机分为4组：A组为生理盐水对照组（NS组）：尾静脉注射生理盐水100μl预处理，6h后通过尾静脉注射100μl生理盐水；B组为人参皂甙Rg1对照组（Rg1组）：尾静脉注射人参皂甙Rg1(5mg/ml，100μl)预处理，6h后通过尾静脉注射生理盐水100μl；C组为Con A对照组（Con A组）：尾静脉注射生理盐水100μl预处理，6h后通过尾静脉注射ConA(4mg/ml，100μl)；D组人参皂甙Rg1保护组（Rg1/ConA组）：尾静脉注射人参皂甙Rg1(5mg/ml，100μl)预处理，6h后通过尾静脉注射ConA(4mg/ml，100μl)。2.各组小鼠经预处理后18h，心脏采血，采用全自动生化分析仪检测外周血谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）浓度，评估肝损伤程度。3.各组小鼠经预处理后18h，取肝脏组织，HE染色，病理切片观察肝损伤。4.各组小鼠经预处理后18h，心脏采血，ElISA法检测外周血TNF-α、IFN-γ、IL-6水平。5.各组小鼠经预处理后18h，取肝脏组织，实时荧光定量PCR法检测肝脏TNF-α、IFN-γ、IL-6、CXCL-10、ICAM-1、NF-κB mRNA表达水平。6.各组小鼠经预处理后18h，取肝脏组织，Westernblot法检测肝脏p65、IκBα磷酸化水平。7.各组小鼠经预处理后18h，心脏采血，采用流式细胞术检测各组小鼠肝脏、外周血及脾脏CD4~+、CD8~+T淋巴细胞计数。【结果】1. Con A组小鼠外周血谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)浓度显著高于Rg1/Con A组、NS组及Rg1组(P均﹤0.01)；而Rg1/Con A组与NS组及Rg1组之间差异无统计学意义(P均>0.05)。2.肝组织HE染色可见，Con A组小鼠肝细胞坏死严重，Rg1/Con A组肝脏病变较ConA组明显减轻。病理评分结果显示，ConA组与Rg1/ConA组差异有统计学意义(P均﹤0.01)，而Rg1/ConA组与NS组及Rg1组比较，差异无统计学意义(P均>0.05)。3．与Con A组比较，Rg1/Con A组小鼠外周血TNF-α、IFN-γ、IL-6水平明显降低(P均﹤0.01)。4.与Con A组相比，Rg1/Con A组小鼠肝内TNF-α、IFN-γ、IL-6、CXCL-10、ICAM-1、NF-κB mRNA表达水平显著降低(P均﹤0.01)。5.与Con A组相比，Rg1/Con A组小鼠肝脏组织p65和IκBα磷酸化水平明显降低。6. Rg1/Con A组小鼠肝脏实质内CD4~+T淋巴细胞浸润较Con A组显著减少(P<0.01)。实验发现ConA组小鼠肝内CD8~+T淋巴浸润较其它组均有所升高，但差异无统计学意义(P均>0.05)。各组小鼠外周血及脾脏中CD4~+、CD8~+T淋巴淋巴细胞计数差异均无统计学意义(P均>0.05)。【结论】1.人参皂甙Rg1通过下调肝脏NF-κB的表达，进一步抑制炎症因子TNF-α、IFN-γ、IL-6的分泌，从而减轻肝脏组织的炎症。2.人参皂甙Rg1减少CD4~+T淋巴细胞在肝脏组织的浸润，可能与其抑制粘附因子ICAM-1及CXCL-10的表达密切相关。