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目的:通过对各种“宿根”学说的分析,借助于现代医学对中医“宿根”概念的新认识,在前期临床与实验研究的基础上,首次明确提出“脾虚为哮喘宿根”的新假说。以培土生金立法,采用健脾益肺的方药,应用现代分子生物学的方法,观察其对脾虚哮喘大鼠嗜酸性粒细胞凋亡形态学及对Fas mRNA、Bcl-2 mRNA表达的影响,探讨脾虚对哮喘的影响及培土生金法治疗哮喘的作用机制。 方法:以中医理论为指导,复合利用中医脾虚动物模型和西医哮喘动物模型的造模方法,建立大鼠脾虚哮喘病证结合的模型。造模成功后,采用培土生金的方法进行治疗。采用TUNEL法进行细胞原位凋亡的检测,肺组织中Fas mRNA、Bcl-2 mRNA的检测采用原位杂交法,并采用双抗体夹心酶联免疫法(ELISA)测定BALF液中IL-5、GM-CSF的浓度。应用光镜对肺组织形态学进行观测。 结果:病证结合组和疾病组同对照组比较,均表现为BALE中GM-CSF的浓度显著升高和TGF-β浓度的显著下降(P<0.01),病证结合组和疾病组与对照组比较,均表现为EOS计数值升高、EOS凋亡率下降(P<0.01或P<0.05),病证结合组和疾病组同对照组比较,均表现为EOS上的Fas mRNA表达的显著减少和Bcl-2mRNA表达的显著增多(P<0.01)。与相应的疾病组相比较,两中药组(A1,B1)GM-CSF的浓度显著降低P(<0.01),TGF-β浓度的显著升高(P<0.01或P<0.05);与相应的疾病组相比较,两中药组中EOS凋亡率明显升高(P<0.05)或P<0.01),同时,与相应的疾病组相比较,两中药组((A1,B1)Bcl-2mRNA表达显著减少(P<0.01),Fas mRNA表达明显增多(P<0.01或P<0.05)。各组大鼠肺组织中Fas mRNA的表达与EOS的凋亡间存在明显的正相关(r=0.62,p<0.05),Bcl-2mRNA的表达与EOS的凋亡间存在着明显的负相关(r=-0.58,p<0.05);各组大鼠BALF中的TGF-β浓度水平与EOS的凋亡率呈显著正相关(r=0.51,p<0.05),各组大鼠BALF中的GM-CSF浓度水平与EOS的凋亡率呈显著负相关(r=-0.65,p<0.01)。病理结果显示:疾病组与病证结合组均有不同程度的支气管及肺组织炎性病变,两治疗组的支气管及肺组织的炎症病变均有所减轻。 结论:培土生金法能促进模型大鼠哮喘及脾虚哮喘状态下EOS的凋亡;培土生金法能上调模型大鼠肺组织EOS表面Fas mRNA的表达,下调EOS表面Bcl-2 mRNA的表达;培土生金法能提高模型大鼠BALF中TGF-β的浓度,降低GM-CSF的浓度;培土生金法能减轻模型大鼠的大、小气道及肺组织的炎症。