第一部分全反式维甲酸(ATRA)对人结肠癌细胞LoVo和SW480/M5作用的实验研究 目的：筛选对LoVo细胞和SW480/M5细胞具有明确增殖抑制作用并适合与其他药物进行联合用药研究的全反式维甲酸(all—transretinoicacid，ATRA)剂量和作用时间；探讨此筛选ATRA分别对两种肿瘤细胞的作用和机理。 方法：MTT法检测不同浓度全反式维甲酸(ATRA)分别作用不同时间对两种肿瘤细胞的增殖抑制率。倒置显微镜下观察各筛选浓度ATRA作用不同时间对肿瘤细胞增殖的形态学改变。流式细胞仪检测：各筛选浓度ATRA作用不同时间对肿瘤细胞周期的改变。流式细胞仪FITC—AnnexinV/PI双染法检测：筛选浓度ATRA作用LoVo细胞48或72h的肿瘤细胞凋亡率：筛选浓度ATRA分别作用SW480/M5细胞24、48、72h及不同浓度ATRA作用48h的细胞凋亡率。 结果：ATRA对两种细胞的增殖抑制率随药物浓度提高和作用时间延长而逐渐增加。1μmol.L-1作用LoVo细胞或8μmol.L-1ATRA作用SW480/M5细胞72h可明显抑制肿瘤细胞增殖，对肿瘤细胞抑制率接近30％；倒置显微镜下可观察到两种肿瘤细胞发生明显分化的形态学改变。1、2、4、8μmol.L-1ATRA分别作用24、48、72h对LoVo细胞的抑制率均明显高于SW480/M5细胞。1μmol.L-1ATRA作用LoVo细胞8h不改变肿瘤细胞周期；其作用12h，细胞G1期比例增加；24h后伴S期比例降低；作用48或72h后，尚伴G2/M期细胞比例降低；且1μmol.L-1ATRA作用LoVo细胞48或72h对肿瘤细胞周期的影响无统计学差异。而2、4μmol.L-1ATRA作用SW480/M5细胞48h或8μmol.L-1ATRA作用24h，肿瘤细胞G1期比例降低，S—期比例增加。8μmol.L-1ATRA作用48h，伴S期比例进一步增高；其作用72h，G1期比例进一步下降，尚伴G2/M期比例明显增加。8μmol.L-1ATRA作用24h无明显诱导SW480/M5细胞凋亡作用。1μmol.L-1ATRA作用48或72h均可诱导LoVo细胞发生凋亡，且其作用72h较作用48h的凋亡率明显增加；8μmol.L-1ATRA作用SW480/M5细胞48或72h均可诱导肿瘤细胞发生凋亡，但对肿瘤细胞凋亡率明显无统计学差异。 结论：LoVo细胞对ATRA的药物敏感性明显高于SW480/M5细胞。1μmol.L-1ATRA作用48或72h通过阻滞LoVo细胞在G1期并诱导细胞分化和早期凋亡，抑制肿瘤细胞增殖。8μmol.L-1ATRA作用48或72h通过阻滞SW480/M5细胞在S—或(和G2/M)期并诱导细胞分化和凋亡，抑制肿瘤细胞增殖。1μmol.L-1ATRA作用LoVo细胞、8μmol.L-1ATRA作用SW480/M5细胞48h，再联合其他药物24h，可分别做为对两种肿瘤细胞进行联合用药研究的基础。 第二部分奥沙利铂(L—OHP)对人结肠癌细胞LoVo和SW480/M5作用的实验研究 目的：探讨奥沙利铂(L—OHP)对人结肠癌淋巴结转移细胞LoVo和定向肝转移细胞SW480/M5作用24h的效果和机理。 方法：MTT法检测不同剂量奥沙利铂(L—OHP)分别作用24h对两种肿瘤细胞的抑制率。倒置显微镜下观察GI50浓度L—OHP作用24h对两种肿瘤细胞的形态学改变。流式细胞仪检测：两种肿瘤细胞自然对数增殖期的细胞周期情况；GI50或1/2GI50浓度L—OHP分别作用24h对肿瘤细胞周期的影响。流式细胞仪FITC—AnnexinV/PI双染法检测：GI50或1/2GI50浓度L—OHP分别作用24h诱导两种细胞的凋亡率及差异。原子光谱吸收仪(石墨炉法)检测GI50浓度L—OHP分别作用两种肿瘤细胞4、8、24h后，肿瘤细胞DNA的含铂(Pt)量及差异。 结果：不同剂量L—OHP作用24h对LoVo细胞的抑制率随药物浓度的提高而增加，其GI50(GI，inhibitnetcellgrowthby％)浓度为6.5mg.L-1；对SW480/M5细胞抑制率自8mg.L-1开始，随药物浓度提高而增加，其GI50浓度为58.0mg.L-1；倒置显微镜下可见两种肿瘤细胞明显受损及死亡的形态学表现。不同剂量L—OHP对LoVo细胞的增殖抑制率明显高于SW480/M5细胞。SW480/M5自然对数增殖的细胞周期与LoVo细胞比较：G1期比例降低，G2/M期比例增加。L—OHP均降低两种肿瘤细胞的G1期比例而升高S期比例；其中L—OHP升高LoVo细胞的S期比例较SW480/M5明显增加；GI50L—OHP升高SW480/M5细胞G2/M期比例而降低LoVo细胞的G2/M期比例。LoVo细胞自然凋亡率较SW480/M5细胞降低。L—OHP均可诱导两种肿瘤细胞发生早期凋亡；且GI50L—OHP诱导的凋亡率较1/2GI50L—OHP明显增高；LoVo细胞1/2GI50(3.25mg.L-1)L—OHP诱导的细胞凋亡率与SW480/M51/2GI50(29.0mg.L-1)L—OHP无统计学差异。两种肿瘤细胞DNA含Pt量随其GI50L—OHP作用时间延长而逐渐增加；LoVo细胞DNA吸收Pt原子的能力较SW480/M5细胞明显增强。 结论：L—OHP作用24h对两种肿瘤细胞的增殖抑制作用呈量效依赖；而对两种肿瘤细胞含Pt量呈时效依赖。LoVo细胞对L—OHP的药物敏感性明显高于SW480/M5细胞。L—OHP阻滞两种肿瘤细胞于S期或(和G2/M期)并诱导肿瘤细胞凋亡。LoVo细胞DNA交联Pt的能力明显强于SW480/M5细胞。 第三部分ATRA提高人结肠癌细胞LoVo和SW480/M5对L—OHP敏感性作用的实验研究 目的：探讨ATRA提高人结肠癌LoVo细胞和SW480/M5细胞对L—OHP药物敏感性的作用和机理。 方法：MTT法检测ATRA作用不同时间、L—OHP作用24h、ATRA作用不同时间后联合L—OHP作用24h对肿瘤细胞的抑制率；金正均法判断两药联合应用效果。倒置显微镜观察两药联用对肿瘤细胞的形态学改变。流式细胞仪检测：ATRA作用72h、L—OHP作用24h、ATRA作用48h后联合L—OHP—24h对两种肿瘤细胞的细胞周期影响；流式细胞仪FITC—AnnexinV/PI双染法检测：不同用药方式对肿瘤细胞凋亡率的影响。琼脂糖凝胶电泳检测不同用药方式诱导LoVo细胞发生晚期凋亡的DNA表现。原子光谱吸收仪(石墨炉法)检测1μmol/LATRA作用LoVo细胞或8μmol/L作用SW480/M5细胞48h后再联合其GI50L—OHP分别作用4、8、24h，两种不同肿瘤细胞DNA的含Pt量。 结果：1μmol/LATRA作用12或24h后再联合GI50L—OHP作用24h，对LoVo细胞的抑制率具有两药相加作用：1μmol/LATRA作用48h后再联合GI50L—OHP作用24h，对LoVo细胞的抑制率具有两药协同作用；联合用药通过降低细胞G1期比例而阻滞LoVo细胞在S期，且阻滞在S期的比例较L—OHP单药明显增高；GI50较1/2GI50L—OHP联合用药阻滞LoVo细胞在S期的比例明显提高。8μmol/LATRA作用24h后再联合L—OHP作用24h对SW480/M5细胞的抑制率具有两药相加作用；8μmol.L-1ATRA作用48h后联合L—OHP—24h对SW480/M5细胞抑制率具有两药协同作用；8μmol/LATRA作用48h后联合1/2GI50L—OHP—24h对SW480/M5细胞的抑制率较GI50L—OHP单药明显增高；联合用药通过降低G1期和提高G2/M期比例而阻滞SW480/M5细胞于S—和G2/M期；联合用药降低肿瘤细胞G1期比例及提高G2/M期比例较L—OHP单药明显增加，且1/2GI50L—OHP联合用药较其单药阻滞肿瘤细胞在S期的比例明显增加。L—OHP联合用药均可诱导两种肿瘤细胞发生早期凋亡；但无表示晚期凋亡的LoVo细胞DNA梯度条带出现。GI50L—OHP联合用药诱导肿瘤细胞的凋亡率均较1/2GI50L—OHP联合用药增高；L—OHP联合用药诱导肿瘤细胞的凋亡率均较低，且不增加L—OHP单药诱导的凋亡率。两种肿瘤细胞DNA含Pt量均随L—OHP联合用药作用时间延长而增加；联合用药细胞较L—OHP单药应用的细胞DNA含Pt量明显增多。 结论：ATRA通过诱导分化人结肠癌LoVo细胞和SW480/M5细胞、改变细胞周期及提高细胞DNA交联Pt原子能力，可明显提高两种肿瘤细胞对L—OHP的药物敏感性。