【摘 要】
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胚胎的休眠和萌发是发育生物学研究的重要内容.利用体细胞胚为材料进行有关的研究具有独特的优越性.该论文在黄美娟等人建立的胡萝卜体细胞胚蔗糖调控-解调控培养体系的基础
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胚胎的休眠和萌发是发育生物学研究的重要内容.利用体细胞胚为材料进行有关的研究具有独特的优越性.该论文在黄美娟等人建立的胡萝卜体细胞胚蔗糖调控-解调控培养体系的基础上,对胚胎的休眠-萌发机理进行了深入的探讨.现简要概括如下:1.控渗法构建胡萝卜基因组文库为了分离胡萝卜体细胞胚蔗糖调控相关基因的调控序列,我们建立了控渗法构建胡萝卜基因组文库的实验技术.2.胡萝卜DcLEAl基因的分离及其功能研究利用改进的cDNA RDA技术,从调控状态的胡萝卜体细胞胚中分离到LEA基因片段,以该片段为探针筛选调控状态的胡萝卜体细胞胚的cDNA文库及我们发展的控渗法构建的基因组文库,获得了胡萝卜LEA基因家族的一个新成员DcLEAl(GeneBank注册号AF308739).3.运用eDNA文库差别筛选与抑制性减法杂交相结合的方法,分离胡萝卜体细胞胚发育相关基因为了得到更多与胡萝卜体细胞胚根发育相关的基因,我们运用抑制性减法杂交和cDNA文库的差别筛选相结合的方法,从解调控12h的胡萝卜体细胞胚cDNA文库中分离出若干与胚根发育相关的基因或基因片段.4.胡萝卜DcEXGTl基因的分离及其表达特性研究利用上述技术路线,首次从胡萝卜体细胞胚中分离到编码一种木质葡聚糖内转糖基化酶的基因DcEXGTl.GenBank登录号:AF349963.其开放阅读框为993bp,编码330个氨基酸和1个终止密码子.通过筛选基因组文库我们获得了该基因的基因组全序列,其中启动区长2001bp,转录区长3015bp包含三个外显子和两个内含子.Southern杂交表明该基因在胡萝卜基因组中以单拷贝形式存在.DcEXGTl基因表达模式分析表明其在解调控12h的胡萝卜体细胞胚中表达水平急剧上升,并且成株的叶、叶柄和根等器官都未检测到该基因的表达.推测该基因可能在胚根发育过程起着一定的作用.
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