水稻黄单胞效应蛋白AvrXa7抑制柑橘溃疡的形成及应用基础研究

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hnfengzhong
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黄单胞菌AvrXa7是水稻白叶枯病菌中的一个Tale蛋白,依赖Ⅲ型分泌系统进入寄主植物细胞,起到无毒蛋白的作用。而柑橘溃疡病菌的效应蛋白PthA4是在柑橘上引起病害发生的一个关键Tale,单个PthA4基因的瞬时表达即可诱导类似溃疡症状的形成。本文将水稻白叶枯病菌的AvrXa7转化进入柑橘溃疡病菌以后,在接种区域仅形成黄化斑,没有溃疡症状。通过转录组学分析柑橘差异表达基因,在溃疡病菌中引入AvrXa7,有138个基因表达水平下调,177个基因表达水平上调,差异表达的基因涉及植物激素信号、氨基酸合成、次生物质代谢、光合作用等多个生物学过程。基于生物信息学分析,对总共315个差异表达基因的启动子序列进行分析,根据TALE-DNA结合的分子密码,推导出PthA4在柑橘中的8个可能靶基因;运用qRT-PCR验证这8个基因在柑橘中的表达;克隆基因的启动子序列,与pCAMBIA1381载体连接后,在烟草植物中与PthA4和AvrXa7共表达,观察PthA4和AvrXa7对启动子活性的影响。都发现Cs9g12620.1、LOB1、Cs4g16550.1 和Cs4g17050.1这四个基因启动子在PthA4上调,而含有AvrXa7后下调。运用EMSA实验,证明PthA4与Cs9g12620.1、LOB1、Cs4g16550.1和Cs4g17050.1基因启动子的结合,明确为PthA4的靶基因;构建干扰载体,拟在柑橘中沉默干扰靶基因的表达,考察这些基因在溃疡症状形成过程中的功能。为了探索稻黄单胞菌AvrXa7在柑橘溃疡病防治中的应用,本研究还分离了对植物病原细菌具有抑制作用的假单胞菌Pseudomonas putida A1。采用浸液接种实验,在P.putida A1中表达avrXa7以后,对溃疡病害的防治效果可从57.8%提高到95.4%,对溃疡病的抑制效果可增加37.6%。
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