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诱导成体细胞和其他非终末分化细胞成为多能性干细胞的iPS技术为我们更加快速地发展和利用再生医学为人类服务提供了一条崭新的道路:它不仅根本上解决了来源以及排异的问题,还规避了可能存在的道德和伦理风险。然而,iPS技术刚刚起步,仍然存在很多问题:首先我们对体细胞重编程为iPSC的过程仍然所知甚少,其核心过程仍然是一个“黑匣子”,这种不确定性为将来的应用带来隐患;更重要的是对iPSC安全性的担忧,转录因子的使用给人们的使用带来困扰。因此iPs技术需要不断改进方法以及对机理更深的了解。
AP1蛋白是在细胞内普遍存在的转录因子家族,都具有靠近羧基端的碱性亮氨酸拉链的共同结构特征。经典的研究结果显示:它们对细胞响应外界紫外线辐照等生理和病理刺激并作出响应的生命过程至关重要,可以调节细胞的增殖、衰老、转化和凋亡等活动。Jun原癌基因是API家族中最有代表性的基因,有研究表明Jun在小鼠胚胎干细胞中的过量表达会造成干细胞的分化,在我们的实验中也证实了过表达Jun的胚胎干细胞向成纤维状细胞分化的现象。我们将其应用到iPS过程中,实验表明在普通四因子Oct4/SOX2/KLF4/c—Myc的基础上加入Jun会使iPS的重编程失败,无法得到iPs克隆;而N端截短的Jun蛋白(显性负效应,JunDN)则反过来可以促进iPs的效率达到对照组的3倍水平。除此之外,我们还考察了JunDN与四因子中任意组合进行搭配的试验,结果表明JunDN可以替代Oct4与另外三因子一起以很低的效率产生iPS细胞,而使用高效的培养基则可以进一步的去除c—Myc产生iPSCs。深入考察AP1家族的其他成员发现,可以与Jun形成异型二聚体发挥作用的Fos oncogene同样可以极大地抑制iPS效率,但是却并不如Jun强烈,而且FosDN也没有类似于JunDN的作用。而更加令人惊奇的发现是Jdp2基因,它是Jun在细胞内的天然抑制因子,起负向调节作用,实验结果表明Jdp2可以在血清培养基中提高普通四因子(SKOM)或三因子(SKO)效率到3倍左右,同时也具有替代Oct4的功能,尤其在高效培养基中与SKM配合的效率可以达到普通四因子的70%。同时,在小鼠胚胎干细胞中转入以上API家族蛋白及其衍生物和短发卡RNA(shRNA)可以促使其分化或对其撤去LIF时的分化现象有抑制作用。综上所述,我们发现了Jun、Jdp2等AP1家族蛋白在小鼠胚胎干细胞以及iPS过程中的新的作用,部分成员可以替代Oct4产生iPSCs。这些结果不但开阔了iPS诱导机制的研究思路,同时也将对iPS诱导方法的优化和改进做出贡献。