M细胞是一种特殊化的扁平上皮细胞,能够主动摄取肠腔内的大分子和微生物等抗原,再将其传递至集合淋巴小结中的抗原呈递细胞,进一步诱导黏膜免疫应答,实现淋巴靶向传递的目的。糖蛋白2（Glycoprotein 2,GP2）和亲环素A（Cyclophylin A,Cyp-A）是M细胞上两种特异性抗原摄取受体,本研究旨在通过原核表达的方法,制备出具有良好的免疫原性和反应原性的GP2和Cyp-A重组蛋白,经动物免疫获得兔抗双峰驼GP2和Cyp-A多克隆抗体,并应用自制抗体对双峰驼回肠中M细胞进行定位表达与分析,推动双峰驼消化道黏膜免疫的研究,为黏膜免疫相关疫苗的研发提供依据。本试验首先在NCBI上截选出双峰驼GP2和Cyp-A基因的编码区（CDs）序列,然后利用生物信息学软件对该序列进行分析,选取膜外序列并截去信号肽。将序列送公司优化合成并构建重组质粒p ET-28a-GP2和p ET-28a-Cyp-A,再转入感受态细胞大肠杆菌BL21中诱导表达,优化诱导条件后,通过SDS-PAGE检测GP2和Cyp-A重组蛋白的表达情况。然后纯化重组蛋白并以此免疫家兔,制备兔抗双峰驼GP2和Cyp-A多克隆抗体,分别使用ELISA和Western Blot技术检测两个抗体的效价和特异性。最后采用HE和SABC免疫组化染色方法,应用自制的GP2和Cyp-A多克隆抗体,对双峰驼回肠中的M细胞进行定位与观察。结果显示:（1）重组质粒p ET-28a-GP2和p ET-28a-Cyp-A主要以包涵体的形式表达,GP2蛋白大小约为65 KD,最佳诱导条件为0.5 mmol/L IPTG、6h,杂蛋白最佳洗脱浓度为20mmol/L咪唑。Cyp-A蛋白大小约为17 KD,最佳诱导条件为0.7 mmol/L IPTG、8 h,杂蛋白最佳洗脱浓度为5mmol/L咪唑。（2）经ELISA和Western Blot检测,兔抗双峰驼GP2多克隆抗体的效价为1:2.56×10~5,能特异性识别重组蛋白GP2;兔抗双峰驼Cyp-A多克隆抗体的效价为1:6.4×10~4,能特异性识别重组蛋白Cyp-A。（3）经HE和SABC免疫组化染色观察,M细胞形态不规则,具有上皮内囊状结构,囊内包含其他淋巴细胞。胞核呈椭圆形或纺锤形,偏于一侧,位于基底膜的胞浆中。兔抗双峰驼GP2多克隆抗体能够有效识别回肠滤泡相关上皮（follicle associated epithelium,FAE）和非FAE中的M细胞,呈阳性反应的M细胞主要散在分布于FAE,部分散在分布于非FAE。而Cyp-A多克隆抗体经本次实验发现仅能够使回肠FAE中的M细胞特异性着色。综上所述,本试验成功制备出效价高、特异性强的兔抗双峰驼GP2和Cyp-A多克隆抗体,经检测能够用以特异性识别双峰驼回肠中M细胞,并且通过自制的抗体对双峰驼回肠M细胞进行了定位与观察,推动了双峰驼消化道黏膜免疫的研究发展,为黏膜免疫的研究提供了一定的理论依据,以期具有参考价值。