【摘 要】
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目的:通过电转化法介导转化生长因子β1(TGF-β1)和EGFP基因转染兔骨髓间充质干细胞(BMSCs),观察Ⅱ型胶原蛋白表达情况。方法:取3只1周龄清洁级健康新西兰大白兔,麻醉后处死,
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目的:通过电转化法介导转化生长因子β1(TGF-β1)和EGFP基因转染兔骨髓间充质干细胞(BMSCs),观察Ⅱ型胶原蛋白表达情况。方法:取3只1周龄清洁级健康新西兰大白兔,麻醉后处死,无菌条件下取出胫骨及股骨,暴露髓腔冲出骨髓,应用全骨髓细胞贴壁培养法分离、培养出兔的BMSCs;流式细胞仪法检测细胞表型;将培养获得的BMSCs分3组:TGF-β1+EGFP共转染组,EGFP单独转染组,空白对照组。利用电转化技术将TGF-β1和EGFP对BMSCs进行转染,荧光显微镜观察转染效果,继续培养至14d[1],应用免疫组化法和western blot法分别检测Ⅱ型胶原表达情况。结果:成功分离并培养出BMSCs,经流式细胞仪鉴定其细胞表型CD90和CD44表达为阳性,CD31和CD45表达为阴性;成功转染TGF-β1至BMSCs后;通过免疫组化检测TGF-β1组细胞内(0.4870±0.0181)Ⅱ型胶原有较强的表达,与EGFP组(0.0858±0.0097)及空白对照组(0.0805±0.0098)相比较有显著差异性(P<0.05)。western blot检测TGF-β1组细胞内(0.320 0±0.006 7)Ⅱ型胶原有较强的表达,与EGFP组(0.2012±0.007 4)及空白对照组(0.1964±0.0041)相比较有显著差异性(P<0.05)。结论:电转TGF-β1质粒至兔BMSCs,能促进Ⅱ型胶原高效表达,进而可以为进一步研究奠定基础。
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