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铁皮石斛是我国古文献中最先记载的药用石斛兰科植物之一,也是我国最珍稀的中药材之一。但是长期以来,人们用此药都是依靠采挖,野生石斛资源濒临灭绝,价格高涨。近年来,铁皮石斛繁殖的技术逐步走入研究者的视野,特别是组织培养技术,通过组培进行快繁是一种解决铁皮石斛资源缺乏的有效途径。但是目前市场上很多厂家培养出的铁皮石斛苗不规范,育苗质量参差不齐,生产成本高,培养条件不优,本研究的主要目的就是在前期铁皮石斛组培快繁基础上,以种胚为原材料,对铁皮石斛组织培养条件进一步优化,研究一次成苗技术,以缩短周期,降低成本,提高芽苗增殖率和质量,为铁皮石斛优良种苗工厂化生产提供科学依据。研究结果表明:1铁皮石斛初代培养条件优化研究。铁皮石斛种子在组培环境下适应性强,对培养基要求不高,从萌发时间、数量、质量看,种胚萌发较好培养基为MS+0.5mg·L-1NAA+15%土豆泥;铁皮石斛种子消毒方式以75%乙醇浸泡30s+8.0%次氯酸钠浸泡8 min效果较佳,较传统升汞溶液消毒方式更具生态性和安全性。2铁皮石斛继代培养条件优化研究。原球茎在培养基MS+0.2mg·L-1NAA+2mg·L-16-BA上的增殖率最高,达到了98%;原球茎分化较好培养基为MS+0.5mg·L-1NAA+10%土豆泥;原球茎增殖系数高于丛生芽增殖系数,增殖速率快。原球茎在液态培育基增殖系数高于固态培育基,但是容易发生褐变。3铁皮石斛生根壮苗培养条件优化研究。生根壮苗培育基较好配比应为MS+0.5 mg·L-1NAA+0.5 mg·L-1IBA+80g·L-1香蕉泥;培养基中增添10%香蕉泥和0.5%活性炭（AC）对于幼苗壮苗生根均有促进作用。4一次性成苗培养技术。一次性成苗培养技术集穴盘育苗和移栽驯化技术于一体,有周期短、流程简单、成本低等特点,穴盘液体育苗方式实现了传统组培过程的简化,比传统培养周期缩短了近30d,成本降低了近10%,同时通过一次成苗技术培养的组培苗,移栽可以提高成活率。