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研究背景和目的隐球菌病是一类严重威胁人们生命安全的疾病。由新型隐球菌引起的脑部感染可引起脑膜及脑实质的炎症,常表现为脑膜脑炎。隐球菌孢子通常通过呼吸道吸入而引起感染,接着定植到肺组织,肺内有大量的肺泡巨噬细胞可以清除外来侵袭物,然而还有一些未被清除的隐球菌孢子潜伏了下来,隐球菌可通过在细胞内或细胞外大量增殖的方式导致肺部的感染,亦或散布到其他器官。它可以潜伏在吞噬细胞,通过“特洛伊木马”形式绕过血脑屏障,最终引起隐球菌性脑膜脑炎,然而新型隐球菌为何倾向定植于脑部的机制尚未阐明。在隐球菌感染早期阶段宿主即可产生干扰素,这是宿主免疫防御的第一道防线。在临床研究中,我们发现隐球菌病患者血清中IFN-α和IFN-γ显著降低,接着通过查阅文献及生物信息学分析,提示miR-155可能在抗隐球菌免疫反应的IFN分泌中发挥重要的调控作用。有研究表明,在T细胞、B细胞和巨噬细胞中,某些特定的抗原及IFN-γ等可以诱导miR-155表达；miR-155基因敲除小鼠出现了严重的免疫功能缺陷,包括B细胞、T细胞及抗原提呈细胞的功能异常；然而关于miR-155在新型隐球菌刺激后引起单核细胞调节干扰素的机制还未被深入研究。因此,本研究拟研究单核细胞抗隐球菌免疫应答中"miR-155-IRF2BP2-干扰素”轴的分子调控机制。为寻找免疫调节治疗提供理论依据和实验基础。实验方法1、采用ELISA分析隐球菌病患者血清干扰素水平,密度梯度离心法分离正常人、隐球菌病患者的外周血单个核细胞,磁珠分选分离出单核细胞,Trizol法抽提RNA,逆转录合成cDNA,实时定量聚合酶链反应检测miRNA的表达水平。2、采用Real-time PCR的方法验证芯片检测的结果,检测单核细胞系U937接受热灭活隐球菌刺激后干扰素的表达；采用脂质体Lipofectamine 2000介导的转染技术,将miRNA-155 mimics和miRNA-155 inhibitor转染入单核细胞系U937中,并用Real-time PCR检测转染前后miRNA-155和干扰素表达变化情况。3、通过权威预测软件TargetScan、PicTar和miRBase取三者交集预测miR-155的可能靶点,然后通过双荧光素酶报告基因技术、Real-time PCR和Western blot方法来验证miR-155的靶点。4、采用siRNA方法沉默IRF2BP2的表达,后用Real-time PCR检测沉默效率及IRF2BP2沉默后IFN-α和IFN-γ的表达变化情况。实验结果1、与健康对照组比较,隐球菌病患者血清IFN-α和IFN-γ水平显著下降,而miR-155在单核细胞中的表达升高。2、热灭活新型隐球菌刺激后,单核细胞系U937表达干扰素能力升高,采用"gain-and loss-of-function"的研究手段,发现miR-155可以负向调控IFN-α和IFN-γ的产生。3、使用双荧光素酶报告基因技术、Real-time PCR和western blot方法验证了miR-155与IRF2BP2的3’UTR具有靶向关系。4、采用siRNA沉默了IRF2BP2的表达后,接受热灭活新型隐球菌刺激后的单核细胞诱导IFN-α和IFN-γ的能力下降。结论miR-155在隐球菌病患者单核细胞中表达量显著升高,IRF2BP2是miR-155的靶点之一。在单核细胞中,miR-155通过IRF2BP2负向调控IFN-α和IFN-γ产生,进而抑制单核细胞抗隐球菌反应,从而导致隐球菌感染致病,因此,miR-155可能是免疫治疗隐球菌病的潜在治疗靶点。