猪链球菌(Streptococcus suis,SS)是一种细菌性传染病原,能引起猪的关节炎、脑炎、败血症等典型症状,病死率高,会引发养猪业严重的经济损失。SS2曾是日本、欧洲和北美流行的主要血清型,目前仍是中国的优势血清型。2,14型及16型猪链球菌可感染人引起脑膜炎、永久性耳聋、败血症和心内膜炎,严重者致死。猪链球菌血清型众多,各血清型之间无交叉保护作用,这给疫苗的研制增加了很多困难。现在只有针对部分血清型(2、7型)的灭活疫苗,目前还没有用于临床的基因工程疫苗。多种毒力因子相互作用形成SS2的致病力,单独以部分毒力因子研制的疫苗起不到完全的免疫保护作用,所以急需研制出副作用小且免疫原性好的疫苗。本研究对采集自广东省9个地级市(惠州、江门、肇庆、珠海、中山、梅州、云浮、韶关、佛山)猪场的病料进行分离纯化。根据形态学、染色及培养特性进行初步鉴定,用PCR方法对疑似菌株进行血清型、毒力基因检测。结果分离到85株猪链球菌,包括4株2型、5株7型、8株9型,68株未鉴定血清型。4株SS2的毒力基因型均为gdh~+/gapdh~+/orf2~+/mrp~+/epf~+/sly~+/fbps~+,提示广东省流行的SS2符合高致病性强毒株的特征。对4株SS2分离株的菌毛相关基因进行检测,并选用8种常见抗菌药物检测链球菌分离株的敏感性。本试验旨在调查广东省猪链球菌的流行情况,了解流行菌株优势血清型和流行菌株主要毒力基因基因型,同时测定流行菌株对常用抗菌药物敏感性,为临床合理用药提供一定的科学依据。2型猪链球菌菌毛基因簇srtBCD只存在强毒力株中,本研究中分离到2株包含srtBCD基因岛的菌株,对其中编号为140415菌株的菌毛基因进行筛选,以筛选出编码菌毛结构蛋白的基因SSU2101。为了在大肠杆菌中高效表达2型链球菌SSU2101蛋白,本试验根据密码子偏好性进行全基因合成SSU2101;然后将其插入原核表达载体pET-32a(+)中,成功构建了重组表达质粒pET-32a-SSU2101,测序鉴定构建成功后,转化至表达菌株BL21(DE3)中,经0.50 M IPTG诱导表达16 h后成功表达出46.4 kDa大小的可溶性重组融合蛋白。该重组蛋白经镍NTA琼脂糖凝胶纯化,利用核酸蛋白仪测得浓度为2.5 mg/mL,并用Western Blot检测验证。为了评价原核表达的2型链球菌SSU2101蛋白免疫原性,本研究采用小鼠攻毒保护试验,结果显示接种含纯化蛋白疫苗的小鼠均获得免疫力,且接种低蛋白组疫苗的小鼠获得最好的免疫力;并用纯化蛋白SSU2101制备疫苗,免疫14天龄仔猪,2周后加强免疫,并设SS2全菌灭活疫苗、纯化蛋白-SS2全菌灭活苗混合组对照。用2型链球菌SSU2101原核表达纯化产物为诊断抗原,建立ELISA检测方法,检测SSU2101蛋白组、灭活苗组和纯化蛋白-SS2全菌灭活苗混合组免疫仔猪抗体水平,结果3组免疫仔猪血清样品均检测到抗体,提示纯化蛋白具有较好的免疫原性。