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目的探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)激活Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)对脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)分泌白介素-1受体拮抗剂(interleukin-1 receptor antagonist,IL-1Ra)、白介素-37(interleukin-37,IL-37)的影响。方法(1)采用组织块法从脐带华通胶组织中分离培养UC-MSCs。(2)流式细胞术检测UC-MSCs表面标志物的表达,鉴定UC-MSCs;检测UC-MSCs细胞周期。(3)CCK-8(Cell Counting Kit)法检测UC-MSCs的对数生长期。(4)实时定量荧光PCR(Real-time PCR)检测UC-MSCs上TLR4 m RNA的表达。(5)LPS不同剂量刺激UC-MSCs后,Real-time PCR及酶联免疫吸附法(enzyme lin-ked immunosorbent assay,ELISA)分别从m RNA与蛋白水平检测UC-MSCs对IL-1Ra、IL-37的分泌。(6)LPS不同时间刺激UC-MSCs后,Real-time PCR及ELISA分别从m RNA与蛋白水平检测UC-MSCs对IL-1Ra、IL-37的分泌。(7)TAK-242阻断TLR4后,Real-time PCR及ELISA分别从m RNA与蛋白水平检测其对LPS刺激UC-MSCs分泌IL-1Ra、IL-37的影响。结果采用组织块法从脐带华通胶组织分离培养UC-MSCs,于75cm2塑料培养瓶中培养,原代培养7~10 d后,观察到组织周边爬出贴壁细胞,呈长梭形。流式细胞术检测UC-MSCs表面标志物,UC-MSCs阳性表达CD29和CD105,不表达CD14和CD34,符合UC-MSCs的生物学特征。细胞生长曲线结果表明,UCMSCs传代培养在48-72 h进入对数生长期。流式细胞术检测UC-MSCs细胞周期,观察到G0/G1期占78.8%,S期占11.6%,G2/M期占9.6%,结果表明UC-MSCs大部分处于静止状态,其潜在的自我更新和增殖能力仍很强。Real-time PCR观察到UC-MSCs上表达TLR4 m RNA。1μg/m L LPS作用于UC-MSCs后,从m RNA与蛋白水平检测UC-MSCs分泌IL-1Ra、IL-37呈时间依赖效应(P<0.05)。TAK-242阻断TLR4后,LPS刺激UC-MSCs(即TAK-242+LPS组)较未阻断组(LPS组)分泌IL-1Ra、IL-37水平减少,其差异有统计学意义(P<0.05),结果表明UC-MSCs对IL-1Ra与IL-37的分泌与TLR4激活有关。结论从脐带华通胶组织中分离培养出原代细胞,经鉴定为UC-MSCs;UC-MSCs阳性表达TLR4 m RNA;LPS可刺激UC-MSCs分泌抑炎细胞因子IL-1Ra、IL-37呈时间依赖效应,该过程主要依赖于TLR4。结果提示在炎症环境中,UC-MSCs可能通过分泌抑炎细胞因子IL-1Ra、IL-37来调节免疫活动,发挥抑炎效应。