鳖甲为鳖科动物鳖(Trionyx sinensis Wiegamann)的背甲,被国家卫生部列为药食两用的中药品种。《神农本草经》将其列为中品。鳖甲味咸,性微寒；归肝肾经；具有滋阴潜阳、软坚散结、退蒸除热之功；《药性论》记载鳖甲“主宿食、瘕块、痃癖气、冷瘕、劳瘦,下气,除骨热,骨节间劳热,结实壅塞”。主治阴虚发热、劳热骨蒸、癥瘕积聚、虚风内动、久疟疟母等。临床经验表明,以鳖甲为君药的多种复方成药在防治损伤方面取得了很好的疗效；现代药理学研究也表明,鳖甲提取物,特别是其中的小分子寡肽物质对肝损伤动物模型表现出一定的药理活性。本文以中西医结合理论为指导,对存在于鳖甲中的具有抗肝损伤活性的寡肽类化合物的药理活性及作用机制进行了初步研究。本实验分为两部分。第一部分：鳖甲寡肽I-C-f-6的抗小鼠急性肝损伤药理研究雄性昆明小鼠47只,体重(22±3)g,随机分为4组：正常组10只、模型组15只、鳖甲寡肽I-C-f-6低、高剂量组各10只、药物毒性组2只。正常组、模型组常规饲养,低、高剂量组分别按照0.17gg/g体重、0.34μg/g体重皮下注射给予I-C-f-6,持续一周,2次／每周,记录体重。在第二周开始时,采用腹腔注射0.15%CCl4橄榄油的方法分别给模型组、低、高剂量组建立小鼠急性肝损伤模型。第三周,眼球取血,检测小鼠肝功能变化,采集肝、脾、胸腺,称重后分别用10%中性福尔马林固定及-70C冻存备检。统计脏器系数的变化并进行形态学检测。实验结果1.小鼠表征变化在实验进行中期,即第二周建造模型开始,可以观察到：模型组小鼠皮毛颜色暗淡,凌乱无序,食少且鼠尾开始出现大量血斑并有出血；与此同时,正常组、低剂量组、高剂量组小鼠饮食正常,皮毛尚有光泽,整齐有序,鼠尾没有出现血斑现象。2.小鼠脏器系数的变化与正常组比较,模型组小鼠肝脾重量明显增加,肝脾指数明显升高(P<0.01)。与模型组比较,鳖甲寡肽化合物I-C-f-6各剂量组小鼠肝脾指数显著降低(P<0.01),并呈现剂量依赖性。结果表明,鳖甲寡肽化合物I-C-f-6能明显对抗致CCl4致肝损伤小鼠肝脾指数和胸腺指数的升高。3.小鼠肝功能水平与正常组比较,模型组小鼠ALT、AST水平明显增加(P<0.01)。与模型组相比,鳖甲寡肽化合物I-C-f-6各剂量组小鼠ALT、AST水平显著降低(P<0.01)。结果表明,鳖甲寡肽化合物I-C-f-6能明显抑制CCl4致肝损伤小鼠的ALT、AST水平的升高。4.形态学检测结果正常组肝细胞排列成索状,肝窦由中央静脉向四周发射并与中央静脉相通：模型组中央静脉壁增厚,周围存在碎片状肝细胞坏死,咆核溶解消失,变为空泡,有些血管周围肝损伤严重,假小叶形成；低剂量组肝窦扩张,脂肪变性较正常组多,较模型组明显减少；高剂量组中央静脉周边脂肪变性,没有出现大片坏死,较模型组轻。结果表明,鳖甲寡肽化合物I-C-f-6可以有效对抗CCl4致肝损伤小鼠形态学的变化。第二部分：鳖甲寡肽I-C-f-6的抗CCl4诱导大鼠慢性肝损伤活性研究SD雄性大鼠48只,体重(170±20)g,随机分为4组：正常组12只、模型组12只、鳖甲寡肽I-C-f-6低、高剂量组各12只。正常组常规饲养,低、高剂量组按照0.12μg/g体重、0.24μg/g体重皮下注射给予I-C-f-6；模型组与低、高剂量组同期造模,腹腔注射30%CCl4橄榄油溶液2次／周,每次2ml/kg体重,持续七周。第七周末,对所有大鼠进行血液采集,检测大鼠肝功能变化；取出肝、脾、胸腺,称重后分别用10%中性福尔马林固定及-70℃冻存备检,统计脏器系数的变化并进行形态学检测；检测血清或肝组织匀浆中MDA、SOD、IL-4、IL-10、TNF-a含量;HE染色光镜下观察组织形态学变化;免疫组化染色观察E-cadherin、VEGF、TGF-β1在肝组织中的表达变化。实验结果1.大鼠体重变化正常组大鼠体重稳步增长；模型组大鼠体重在实验后期成平稳状态；低剂量组大鼠体重增长趋于正常组大鼠,较正常组增长减缓；高剂量组大鼠体重增长幅度介于模型组与低剂量组之间。结果表明,鳖甲寡肽化合物I-C-f-6能够显著抑制CCl4诱导的慢性肝损伤大鼠体重的降低。2.大鼠脏器系数的变化与正常组比较,模型组大鼠肝脾重量明显增加,肝脾指数明显升高(P<0.01)。与模型组比较,鳖甲寡肽化合物I-C-f-6各剂量组大鼠肝脾指数显著降低(P<0.01),并呈现剂量依赖性。结果表明,鳖甲寡肽化合物I-C-f-6能明显对抗致CCl4诱导的慢性肝损伤大鼠肝脾指数和胸腺指数的升高。3.大鼠肝功能水平与正常组比较,模型组大鼠ALT、AST水平明显增加(P<0.01)。与模型组相比,鳖甲寡肽化合物I-C-f-6各剂量组大鼠ALT、AST水平显著降低(P<0.01)。结果表明,鳖甲寡肽化合物I-C-f-6能明显抑制CCl4诱导的慢性肝损伤大鼠的ALT、AST水平的升高。4.MDA、SOD的含量模型组与正常组比较,SOD活性明显降低(P<0.05),MDA含量(P<0.05)明显增加；低剂量组和高剂量组能不同程度地提高SOD活性,减少MDA的生成,与模型组比较,有显著性差异(P<0.05)。低剂量组效果更佳。5.细胞因子(IL-4、IL-10、TNF-a)的含量模型组与正常组比较TNF-a含量显著上升,IL-4、IL-10含量显著下降；低剂量组和高剂量组可以明显降低TNF-a的含量,升高IL-4、IL-10的含量,与模型组比较有显著性差异(P<0.05)。6.HE染色结果正常组肝组织排列正常；模型组肝组织中,肝细胞片状坏死严重,假小叶已形成；低剂量组趋于正常组,但视野中可见少量肝脂肪空泡；高剂量组肝细胞脂肪化严重,肝细胞有坏死趋势,还没有形成片状坏死,较模型组轻。结果表明,鳖甲寡肽化合物I-C-f-6能明显抑制CCl4诱导的慢性肝损伤大鼠形态学变化。7.免疫组化染色结果(E-cadherin、VEGF、TGF-β1)E-cadherin、VEGF、TGF-β1这三个抗体均在正常组无表达或少量表达；模型组呈强阳性表达；低剂量组弱阳性表达；高剂量组表达水平介于低剂量组和模型组之间。结果表明,鳖甲寡肽化合物I-C-f-6有可能是通过抑制E-cadherin、VEGF、TGF-β1的增加来抑制CCl4诱导的大鼠慢性肝损伤的发生。