本研究检测了泰乐菌素、恩诺沙星与氟苯尼考对猪肝CYP1A2、2E1和3A活性与表达的影响及作用机制，经典抑制剂对猪CYP1A和3A亚型的抑制作用，旨在探讨药物对猪CYP1A和3A的影响及影响机制，为临床合理用药提供理论依据。具体研究内容分为以下四个部分:　　 1.泰乐菌素、恩诺沙星和氟苯尼考对猪肝CYP1A2、2E1与3A活性的影响。以咖啡因、氨苯砜和氯唑沙宗为探针建立了用高效液相色谱法检查猪肝CYP1A2、CYP3A与CYP2E1活性的Cocktail法，体内探针试验检测泰乐菌素、恩诺沙星和氟苯尼考对猪肝CYP1A2、CYP2E1与CYP3A活性的影响。选取12头健康的三元猪，随机分为四组，分别按10，5，20 mg/kg肌肉注射泰乐菌素、恩诺沙星和氟苯尼考，每天一次，对照组给予等量的生理盐水，在第11天分别按照10 mg/kg，10 mg/kg，20mg/kg BW的剂量耳缘静脉给予探针药物咖啡因、氨苯砜与氯唑沙宗后采血，按所建立的Cocktail法分析三个探针药物的药动学参数的变化。试验结果表明连续10天分别肌注10mg/kg泰乐菌素、5mg/kg恩诺沙星和20 mg/kg氟苯尼考，泰乐菌素组咖啡因的Cl、Vss显著下降(P＜0.05），AUC、t1/2升高，氯唑沙宗的消除半衰期t1/2显著减少(P＜0.05），其药时曲线下面积AUC、稳态表观分布容积Vss分别只有对照组的65％与88％，清除率则是对照组的1.61倍，说明泰乐菌素可以抑制CYP1A2的活性，诱导CYP2E1的活性;恩诺沙星组的咖啡因代谢的Cl显著下降(P＜0.05)，Vss、AUC、t1/2分别是对照组的80％、183％与149％，说明恩诺沙星可以抑制CYP1A2的活性;氟苯尼考组的氨苯砜药时曲线下面积AUC、消除半衰期t1/2与对照组相比，分别只有后者的75％和67％，而清除率则是对照组的1.33倍，提示氟苯尼考对代谢氨苯砜的3A有一定的诱导作用。　　 2.泰乐菌素、恩诺沙星和氟苯尼考对猪肝CYP1 A2、CYP2E1、CYP3A29、PXR与AhR mRNA表达的影响。为了解这三种常用抗菌药对CYP450活性诱导的机制，泰乐菌素、恩诺沙星和氟苯尼考按推荐剂量，连续10天肌肉注射给药后，采用分光光度计测定对猪肝CYP450含量的影响，普通RT-PCR和荧光定量PCR检测对猪肝CYP1A2、CYP2E1、CYP3A29、PXR与AhR mRNA表达的影响。结果表明:各组间细胞色素P450的含量没有显著差异(P＞0.05)，荧光定量PCR检测显示CYP1A2、CYP2E1、CYP3A29、PXR与AhR基因表达没有显著差异(P＞0.05)。结果提示泰乐菌素、恩诺沙星和氟苯尼考对猪肝细胞色素P450的CYP450含量、CYP1A2、CYP2E1、CYP3A29、PXR与AhR mRNA表达无显著影响。　　 3.泰乐菌素、恩诺沙星、氟苯尼考对猪肝CYP1A2、CYP2E1与3A蛋白表达的影响。泰乐菌素、恩诺沙星与氟苯尼考分别按10、5、20mg/kg肌肉注射给药，连续10天，免疫印迹测定对CYP1A2蛋白、2E1蛋白与3A蛋白表达的影响。结果显示泰乐菌素使猪肝CYP1A2和3A蛋白表达减少，差异极显著(P＜0.01);而恩诺沙星对CYP1A2蛋白表达呈现抑制的作用，差异极显著(P＜0.05);氟苯尼考抑制CYP3A蛋白的表达，差异极显著(P＜0.05）。没有观察到这三个药物对CYP2E1蛋白表达有影响(P＞0.05)。　　 4.α萘黄酮和酮康唑及泰乐菌素、恩诺沙星、氟苯尼考对猪CYP1A和CYP3A活性的抑制程度及抑制机制。建立反相高效液相色谱法测定猪肝微粒体中非那西丁、咪达唑仑及其代谢物的方法，测得猪肝微粒体代谢非那西丁和咪达唑仑的动力学特征，研究人CYP1A与CYP3A的经典抑制剂α萘黄酮和酮康唑及泰乐菌素、恩诺沙星、氟苯尼考对猪非那西丁0-脱乙基化活性和咪达唑仑1-羟基化活性的抑制程度及抑制机制。取猪肝微粒体混合样，建立体外孵育体系，以对乙酰氨基酚和1-羟基咪达唑仑的生成速率分别反映CYP1A与CYP3A的活性。猪肝微粒体代谢非那西丁的Vmax为0.3496 nmol/mg/min，Km为12.63μM;代谢咪达唑仑的Vmax为0.4406 nmol/mg/min，Km为7.175μM;α-萘黄酮、恩诺沙星对猪非那西丁的代谢表现为竞争性-非竞争性抑制，IC50分别为8.442μM与141.40μM，Ki分别为8.522μM与193.28μM;泰乐菌素对非那西丁的代谢表现为非竞争性抑制，IC50为53.40μM，Ki为196.15μM，未检测到氟苯尼考对非那西丁的可逆性抑制作用。酮康唑对猪咪达唑仑的代谢为非竞争性抑制，IC50为0.03515μM，Ki为0.0362μM;泰乐菌素对猪咪达唑仑的代谢为竞争-非竞争性抑制，IC50为11.13μM，Ki为15.498μM;氟苯尼考对猪咪达唑仑的代谢为为竞争性抑制，IC50为22.40μM，Ki为26.58μM，没有检测到恩诺沙星对咪达唑仑的可逆性抑制作用。体外检测到泰乐菌素、恩诺沙星、氟苯尼考均对非那西丁代谢呈现时间依赖性的不可逆抑制作用，恩诺沙星对咪达唑仑代谢也呈现时间依赖性的不可逆抑制作用。结果表明，与人相比，猪的CYP1A和3A活性均相近，α-萘黄酮对猪CYP1A的抑制作用不如人强，而人CYP3A的经典抑制剂酮康唑对猪咪达唑仑1-羟基化活性的抑制作用同样很强，泰乐菌素和恩诺沙星对猪肝微粒体CYP1A的非那西丁代谢有较弱的抑制作用，泰乐菌素和氟苯尼考对猪肝微粒体CYP3A的咪达唑仑代谢则有较强的抑制作用;时间依赖性的不可逆抑制作用可能是导致CYP活性降低的另一个重要原因，最终可能会导致体内药物的相互作用。