复方扶正祛邪中药对P388/VCR裸鼠模型Bcl-2表达影响的研究

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目的:本研究建立P388/VCR细胞白血病多药耐药模型,予小、中、大剂量的复方扶正祛邪中药联合长春新碱(VCR)作用于裸鼠模型,用荧光定量PCR(RT-PCR)检测B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)的表达,探讨复方扶正祛邪中药逆转白血病多药耐药可能的机制。  方法:(1)细胞培养:将P388/VCR细胞在37℃、5%CO2条件的培养箱内进行培养,按常规细胞传代方法进行传代。(2)实验分组:所购裸鼠随机分成,NOR组:正常对照组、MOD组:模型组、VCR组:单纯化疗组、LOW组:复方扶正祛邪中药小剂量+VCR组、MED组:复方扶正祛邪中药中剂量+VCR组、HIG组:复方扶正祛邪中药大剂量+VCR组。(3)造模及用药:1×107个/ml个的对数期生长的P388/VCR细胞、量为0.2ml/只,于裸鼠皮下注射0.1ml,尾静脉注射0.1ml。取尾静脉血及骨髓涂片,经过染色后油镜下观察细胞形态,计算白血病细胞所占百分比,判断造模是否成功;NOR组给予裸鼠蒸馏水灌胃、MOD组给予生理盐水灌胃,VCR组给予长春新碱腹腔注射,其余组分别给予小、中、大剂量复方扶正祛邪中药灌胃及VCR腹腔注射(VCR:1次/2d×5次,复方扶正祛邪中药:1次/d×10次)。(4)观察用药前、后裸鼠的精神、觅食、皮肤色泽、活动度,测量用药后裸鼠瘤体重量情况,计算抑瘤率。(5)待各组治疗结束后第二日切除瘤体,并用RT-PCR检测各组样本Bcl-2基因表达量。  结果:(1)裸鼠接种后,瘤体形成时间:5.05±0.72天,成瘤率91%。(2)除NOR组外的其余各组用药后裸鼠瘤体重量对比发现,MOD组因未使用药物治疗,瘤体重量大于其余各组,中药联合化疗组重量均显著小于VCR组(P<0.05),HIG组瘤体重量小于LOW组与MED组(P<0.05),LOW组与MED组比较无显著性差异(P>0.05),HIG组裸鼠的瘤块重量明显比其他组小。对比抑瘤率,中药各组抑瘤率均大于化疗组。(3)RT-PCR检测Bcl-2基因的表达,与VCR组相比,使用了复方扶正祛邪中药的HIG组、MED组与LOW组的BCl-2表达量均出现显著降低(P<0.05);各复方扶正祛邪中药浓度组之间比较结果表明,HIG组BCl-2表达量高于MED组和LOW组,但差异没有统计学意义(P>0.05)。说明复方扶正祛邪中药逆转白血病细胞耐药株P388/VCR耐药机制,可能是通过下调Bcl-2表达实现的,与中药浓度无明显关系。  结论:①复方扶正祛邪中药能抑制P388/VCR细胞增长。②复方扶正祛邪中药可降低P388/VCR耐药细胞裸鼠模型Bcl-2的表达,与复方扶正祛邪中药浓度无明显关系;③逆转白血病耐药细胞株P388/VCR的机制之一可能与下调Bcl-2的表达相关。
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