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稻虾养殖是现今小龙虾的主要生产方式,为提高稻虾种养的效益,需要对稻田施肥。施肥会对稻虾种养田水质造成影响,同时克氏原螯虾的生物扰动作用也会对土壤-水界面的物质交换产生影响,但具体影响尚不清楚。稻田追肥后水体的铵态氮会有1-2d的峰值,之后稻田水铵态氮长期处于低浓度状态。因此本文研究了不同施肥处理下克氏原螯虾扰动对水质、土壤理化性质的影响,并进一步研究了氨氮短期胁迫与恢复对克氏原螯虾抗氧化和免疫能力、组织结构的影响与氨氮长期胁迫对克氏原螯虾抗氧化和免疫能力、组织结构与肠道菌群的影响,旨在为克氏原螯虾的稻田健康养殖提供参考。1.克氏原螯虾扰动对肥料释放及示踪颗粒物垂直分布的影响实验氮肥、磷肥、钾肥分别按180 kg/hm~2、90 kg/hm~2、90 kg/hm~2的标准施用,设置施无机肥扰动组、施无机肥对照组、施有机肥扰动组、施有机肥对照组、不施肥扰动组和不施肥对照组这6个处理组,同时采用示踪颗粒物示踪法,在扰动组和对照组的0cm处和5cm处埋入示踪颗粒物,进行为期15d的实验。结果表明:克氏原螯虾扰动15d会对土壤0-11cm深处的肥料产生扰动作用,使施无机肥后水体的氨氮峰值提高51.81%,使施有机肥后水体的氨氮峰值提高53.02%。扰动对施无机肥后土壤总氮和速效磷产生显著影响,使释放率分别增加了36.59%和11.51%。对施有机肥土壤总氮产生显著性差异,土壤总氮的释放率增加了36.39%,对速效磷释放无显著影响,表明施用有机肥对于土壤中磷的保持强于施无机肥。稻虾种养施用有机肥且肥料施到土壤11cm以下有助于肥料缓释。2.氨氮短期胁迫与恢复对克氏原螯虾抗氧化和免疫能力及组织结构的影响在水温（26.4±0.32）℃、p H 7.83±0.11的条件下采用生物毒性实验方法研究了氨氮对体重为（6.33±0.73）g克氏原螯虾的LC50。设置0、20、40、60、80mg/L这5个氨氮浓度,研究了氨氮胁迫48h和恢复48h对克氏原螯虾肝胰腺、鳃和血清T-AOC、T-SOD、CAT、ACP、AKP及MDA含量的影响,以及对克氏原螯虾肝胰腺和鳃组织结构的影响。结果表明:氨氮对克氏原螯虾24、48、72、96h的LC50分别为359.37、238.09、196.34、162.00mg/L,安全浓度为16.20mg/L。氨氮胁迫48h后,40、60、80mg/L组肝胰腺的T-SOD活性显著高于对照组,80mg/L组鳃的T-AOC显著降低、CAT活性显著增强,80mg/L组血清的T-AOC显著增强。恢复48h后,肝胰腺的MDA含量,鳃的MDA含量和CAT活性,血清的T-AOC尚未恢复至正常水平,其他酶活均已恢复。氨氮胁迫48h,随着氨氮浓度的升高,肝胰腺管腔逐渐变形增大、转运泡增多,鳃的呼吸上皮细胞开始脱落、微血管腔受损。恢复48h后,肝胰腺的组织结构基本恢复正常,40、60、80mg/L组鳃局部呼吸上皮细胞脱落,微血管腔受损。综上,稻虾种养施肥后水体产生的氨氮,胁迫48h会对克氏原螯虾肝胰腺、鳃、血清的抗氧化和免疫能力与肝胰腺、鳃的组织结构造成一定的损伤。经过48h的恢复后,肝胰腺、鳃和血清的生理功能可以得到不同程度的恢复,仅肝胰腺的MDA含量,鳃的MDA含量和CAT活性,血清的T-AOC尚未恢复至正常水平,肝胰腺的组织结构基本恢复正常,鳃组织结构未完全恢复。3.氨氮长期胁迫对克氏原螯虾生长存活、抗氧化和免疫能力及组织结构的影响将克氏原螯虾（6.18±0.68）g暴露于氨氮浓度为0、2、4、8、16mg/L中35d,研究了氨氮胁迫对克氏原螯虾肝胰腺、鳃和血清T-AOC、T-SOD、CAT、ACP、AKP及MDA含量的影响,以及对克氏原螯虾肝胰腺和鳃组织结构的影响。结果如下:氨氮长期胁迫35d对克氏原螯虾的存活率、增重率、特定生长率、出肉率和肝胰腺指数无显著影响。氨氮胁迫35d后,4、8、16mg/L组鳃的T-SOD活性显著高于对照组,16mg/L组血清的CAT活性显著低于对照组,4、8、16mg/L组血清的ACP活性均显著低于对照组,2mg/L组各组织酶活与对照组相比无显著性差异。氨氮胁迫35d后,2、4mg/L组肝胰腺和鳃组织结构未受损,8mg/L、16mg/L组肝胰腺管腔、转运泡增大,管腔内部基膜扩张成多边形。8mg/L、16mg/L组鳃呼吸上皮细胞脱落,微血管腔结构受损形成的空泡变大。综上,稻田施肥后产生的长期水体氨氮（2mg/L以下）胁迫35d对克氏原螯虾生长存活、抗氧化和免疫能力及组织结构没有显著影响。4.氨氮长期胁迫对克氏原螯虾肠道微生物的影响将克氏原螯虾（6.18±0.68）g暴露于氨氮浓度为0、2、4、8、16mg/L的水体中35d,研究了氨氮胁迫对克氏原螯虾肠道菌群的影响。结果表明:2、8、16mg/L氨氮胁迫35d会显著降低克氏原螯虾肠道菌群的多样性,但是对菌群丰富度没有显著影响。氨氮胁迫通过降低肠道内厚壁菌门（Firmicutes）和放线菌门（Actinobacteriota）的相对丰度,影响克氏原螯虾的肠道功能。氨氮胁迫能引起各实验组Shewanella、Candidatus＿Bacilloplasma、Rhodobacter、Mycobacterium、Flavobacterium这些菌属相对丰度发生显著变化,增加虾体对某些致病菌的感染性,破坏虾肠道菌群平衡。推测当稻虾养殖水体的氨氮达到2mg/L时,长期养殖即会对克氏原螯虾肠道菌群造成破坏。