牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis]是革兰氏阴性、严格厌氧菌。牙龈卟啉单胞菌产生多种与致病性有关的毒性因子(virulence factors),是目前已确定引起牙周炎的主要病原菌之一。近年来的研究发现,牙龈卟啉单胞菌感染也与许多严重的系统性疾病,如动脉粥样硬化和糖尿病等相关。研究牙龈卟啉单胞菌的致病因子作用机理及其受各种因素的调节是病原微生物学中一个重要课题。本研究选用牙龈卟啉单胞菌低毒力菌株ATCC33277和高毒力菌株W83菌株作为研究对象,对这两株菌部分生物学特性进行了检验,研究了牙龈卟啉单胞菌的致病因子的表达受环境因素调节影响,并构建了牙龈卟啉单胞菌的果蝇感染的致死实验动物模型。牙龈卟啉单胞菌生长代谢过程受多种外界环境因素的调控,如氧化压力、温度、pH值、渗透压、营养条件等。本实验中使用测定菌的生长和荧光实时定量PCR,检测不同氧化压力条件下、培养基缺失生长因子时牙龈卟啉单胞菌的生长和致病因子基因的表达变化。实验结果显示H2O2在较低浓度时对生长影响不显著,但明显下调了毒性因子vimA、ragA、rgpA、rgpB、fimA、hagA、kgp表达,且hagA、fimA基因表达量下调达10之以上。氯化血红素或维生素K1缺乏时明显降低ATCC33277生长,对W83生长有降低趋势,但结果不显著。实验中尝试了使用基因同源置换的方法敲除vimA、ragA、rgpA、mfal这四个毒性基因,用于研究这些基因对生长和毒性的影响。口腔微生物之间的相互作用可以影响生物被膜的性质和形成。口腔菌种类繁多,除了部分致病菌外还有一些益生菌,跟致病的牙龈卟啉单胞菌等存在拮抗作用。血链球菌(S.scristatus)是口腔益生菌群之一,对牙龈卟啉单胞菌有抑制作用。本实验研究了血链球菌的菌体蛋白、血链菌素对牙龈卟啉单胞菌生长和生物被膜的影响。实验结论显示血链球菌菌体蛋白和血链球菌培养物上清液可以提高牙龈卟啉单胞菌生物被膜产量,血链菌素对ATCC33277、W83生长抑制不明显,但明显降低生物被膜产量。构建动物模型是医学和病原微生物学中研究致病性的重要方法。果蝇是常见有效的模式动物,且具有样本量大,繁殖速度快,经济等优点,本研究中使用果蝇构建牙龈卟啉单胞菌的动物感染模型。实验中使用针刺感染、喂养方法构建果蝇致死模型,用于研究牙龈卟啉单胞菌致病性和毒性,以及牙龈卟啉单胞菌浓度跟致病性的联系。结果表明牙龈卟啉单胞菌对果蝇有一定的毒性,毒性跟菌体的浓度有相关性,高度感染时可以导致果蝇死亡。总之,本课题通过对ATCC33277和W83的生物学特性检测、不同因素对致病因子的调节研究以及果蝇致死动物模型的建立,为牙龈卟啉单胞菌致病机理方面更深层次的研究,打下一定的理论和实验基础。