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目前,关于国内外转Bt基因抗虫耐除草剂水稻遗传稳定性有一些报道,但其中大多数为转基因水稻的早期世代,主要以转基因水稻的基因功能和性能的分析以及一些对转基因水稻的利用效果评价。以国内具有自主知识产权的基因转化获得的Bt水稻材料为基础的鉴定工作不多,尤其是利用传统育种手段杂交获得转Bt基因抗虫耐除草剂水稻高代自交系的遗传稳定性的研究还未见报道。本研究以华中农业大学提供的T2A-1和T1C-19两个转基因抗虫耐除草剂水稻与江西农业大学自主选育的优质恢复系昌恢T025、昌恢891、昌恢881、昌恢871、昌恢121杂交,经过回交四代自交多代获得高世代昌恢T025(1C)、昌恢T025(2A)、昌恢T025(1C+2A)、昌恢881(1C)、昌恢881(2A)、昌恢881(1C+2A)、昌恢891(1C)、昌恢891(2A)、昌恢891(1C+2A)、昌恢871(1C)、昌恢871(2A)、昌恢121(1C)、昌恢121(2A)转基因抗虫耐除草剂水稻恢复系为研究材料。采用SSR标记法对水稻遗传背景进行分析,利用PCR、Southemblot、Real-time PCR、ELISA等各种分子检测手段进行外源基因的遗传稳定性和遗传规律分析,通过田间及室内水稻抗性鉴定[2],进行农艺性状及品质性状考察分析,主要研究结果如下:(1)对8个转基因抗虫耐除草剂水稻品系BC4F8、BC4F9两个世代进行全基因组遗传背景分析中,除昌恢T025(1C)和昌恢871(2A)两个世代间有差异外,其它转基因改良株系实际背景回复率与理论背景回复率无明显差异,均达到回交育种要求。(2)PCR-Southemblot分子杂交结果显示,Bt-Cry1C基因在阳性对照和5个转基因水稻世代中均为双拷贝;Bt-Cry2A基因在阳性对照和5个转基因水稻世代中均为单拷贝;PAT-bar基因在阳性对照和8个转基因水稻中均为双拷贝。(3)利用Real-time PCR技术研究Bt-Cry1C、Bt-Cry2A、PAT-bar基因在转基因改良株系世代及阳性对照内的时空表达规律。3个基因在转基因改良株系世代及阳性对照表达情况如下:在营养生长期缓慢增加或减少,生殖生长期基因表达量迅速增加,在抽穗期表达量最高,成熟期后迅速下降;不同组织3个基因相对表达量表现出“叶片组织>茎秆组织>穗组织>胚乳组织”。(4)用ELISA技术对Bt-Cry1C、Bt-Cry2A、PAT-bar基因在转基因改良株系世代蛋白表达量时空表达分析结果如下:不同品系转基因水稻世代蛋白表达量不同;8个转基因水稻世代相关性分析可知:昌恢T025(2A)、昌恢891(2A)和昌恢891(1C+2A)世代稳定性最高。(5)室内抗虫鉴定中:3个双价转基因水稻对二化螟抗虫性等级均达到高抗水平,转基因水稻对一龄期幼虫抗性效果较好;田间抗虫鉴定中:转基因与非转基因水稻对比,表现出较好的抗性。(6)耐药性鉴定分析:整个生育期均表现出高抗水平。(7)转基因水稻两个世代农艺性状分析,除千粒重外其它性状两个世代间表现出很高的遗传稳定性,品种间差异性显著,结实率和有效穗是影响单株产量的主要因素;品质性状分析结果显示,品种间差异性显著,世代间品质性状差异性显著主要原因可能与海南和三亚两地的气候条件有关。