【摘 要】
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研究目的:研究玻璃体腔脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）注射诱导的大鼠视网膜炎症中视网膜胶质细胞的活化和TRPV4分子在该炎症反应中的作用及其机制。研究方法:通过大鼠玻璃体腔注射LPS建立大鼠视网膜炎症模型。通过GFAP、IBA1免疫荧光染色的方法检测视网膜Müller胶质细胞和小胶质细胞的活化及活化维持时间;通过免疫荧光染色及western blot的方法检测玻璃体腔注射LP
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研究目的:研究玻璃体腔脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）注射诱导的大鼠视网膜炎症中视网膜胶质细胞的活化和TRPV4分子在该炎症反应中的作用及其机制。研究方法:通过大鼠玻璃体腔注射LPS建立大鼠视网膜炎症模型。通过GFAP、IBA1免疫荧光染色的方法检测视网膜Müller胶质细胞和小胶质细胞的活化及活化维持时间;通过免疫荧光染色及western blot的方法检测玻璃体腔注射LPS 1天后视网膜TRPV4蛋白分子的表达的改变。玻璃体腔注射LPS 30分钟前给与玻璃体腔注射TRPV4分子特异性抑制剂HC067047,应用qPCR的方法检测TRPV4特异性调控之后对大鼠视网膜促炎性因子的表达改变。研究结果:成功诱导了视网膜炎症模型,玻璃体腔注射LPS后视网膜Müller胶质细胞的GFAP表达明显上调,到注射后第14天仍显著上调;视网膜表达IBA1的小胶质细胞数目明显增加,到注射后第14天仍较对照组增加。玻璃体腔注射LPS 1天后可以诱导视网膜TRPV4的表达明显上调。TRPV4抑制剂HC067047可以明显的抑制LPS诱导的TRPV4mRNA以及视网膜促炎性因子IL-1β、TNFα、IL6、MMP9的mRNA表达上调。研究结论:玻璃体腔注射LPS诱导的视网膜炎症可以持续到注射后第14天。在LPS诱导的视网膜炎症中,TRPV4抑制剂可以通过抑制促炎性因子的表达减轻视网膜的炎症反应。研究目的:探究玻璃体腔脂多糖注射导致的视神经头及视神经的炎症损伤及其机制。研究方法:通过大鼠玻璃体腔注射LPS建立大鼠视网膜炎症模型。通过GFAP、IBA1免疫荧光染色的方法检测LPS注射1天、7天、14天后视神经星形胶质细胞和小胶质细胞的反应;通过MBP免疫荧光染色及透射电镜的方法观察LPS注射后视神经髓鞘的结构;通过qPCR的方法检测LPS注射1天后促炎性细胞因子的mRNA水平的改变;通过转录组测序的方法检测LPS注射1天后视神经头的转录组的改变;通过免疫荧光染色的方法检测视神经头GFAP、AQP4、TRPV4的表达。研究结果:玻璃体腔注射LPS 1天、7天、14天视神经的GFAP平均荧光强度及IBA1染色阳性细胞数目均没有显著改变;MBP平均荧光强度没有明显改变,但是视神经的透射电镜显示LPS注射后视神经存在轻微的脱髓鞘;LPS注射1天后促炎性细胞因子的mRNA水平没有明显改变;视神经头转录组测序结果显示两组之间组织的分子转录水平存在明显的差异。星形胶质细胞细胞特异性的标志物GFAP、AQP4在视神经头的蛋白表达没有明显的改变,TRPV4在视神经头的蛋白表达没有明显的改变。研究结论:研究结果提示玻璃体腔注射的LPS可能不能直接进入视神经,进而引起视神经星形胶质细胞细胞和小胶质细胞的明显活化,但引起视神经的轻度的脱髓鞘反应。玻璃体腔注射LPS诱导了视神经头的转录水平的明显改变,提示视神经头可能在视网膜炎症向视神经扩散中起屏障性作用。
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