【摘 要】
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目的与研究背景:本课题采用氯胺-T法和Iodogen法两种标记方法进行反义寡脱氧核苷酸的125I间接标记对比研究,并在两种方法中分别探讨不同反应条件下的标记率及标记产物的放化
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目的与研究背景:本课题采用氯胺-T法和Iodogen法两种标记方法进行反义寡脱氧核苷酸的125I间接标记对比研究,并在两种方法中分别探讨不同反应条件下的标记率及标记产物的放化纯、比活度和稳定性。力求找到最合适的标记方法、最恰当的标记条件。为今后碘标记的反义药物应用于临床奠定实验基础。乳腺癌c-erbB2基因有条件激活和扩增是乳腺癌的早期事件,胞浆中mRNA增加,使与目的mRNA互补的反义寡脱氧核苷酸(ASODN)识别及结合增加。用放射性核素标记ASODN,在体外显像可以诊断体内mRNA水平变化,肿瘤的存在和大小。因此可实现对肿瘤的早期无创性诊断。放射性核素标记ASODN是反义显像药物合成的最关键步骤。标记药物制备不成功就无法进行下一步的药物体内外分析,更谈不上反义显像和反义治疗。因此,探索高效、便捷、稳定的标记方法,是将反义显像和治疗技术应用于临床的重要基础。方法:1、氯胺T法125I直接标记乙酰双半胱氨酸(EC),证明其可行性。2、设计并合成c-erbB-2基因的部分硫代ASODN,序列为5’-CTC CAT GGT GCT CAC-3’。3、EC与ASODN连接,纯化,冷冻干燥。琼脂糖电泳鉴定其结构。4、按照正交设计表,改变反应温度、反应时间、氯胺-T或Iodogen用量及反应的PH值,以氯胺T法和Iodogen法分别进行125I标记
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