二甲双胍对小鼠睾丸相关细胞的体外抑制作用及其机制研究

来源 :内蒙古医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:looksky1989
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
背景:二甲双胍作为胰岛素的增敏剂,是临床上治疗2型糖尿病的常用药。近年的研究提示,除了降糖作用,二甲双胍亦有许多其他作用,例如降低血压、心血管保护和抗肿瘤作用。在生殖方面,采用二甲双胍联合用药可用于改善女性的多囊卵巢综合征,但有关二甲双胍与男性生殖的研究甚少。如今,不孕不育问题日益严峻,而糖尿病因影响精子发生又会间接导致男性不育。因此,随着育龄男性患糖尿病人数的增加,明确二甲双胍对男性生殖细胞的影响,将为临床治疗糖尿病男性患者的不育问题提供一定的理论基础。  目的:通过研究二甲双胍对小鼠睾丸发育相关细胞株增殖、凋亡及周期的影响,初步探讨二甲双胍在小鼠睾丸发育中作用的分子机制。  方法:  1.采用MTT法检测不同浓度的二甲双胍对小鼠睾丸间质细胞(TM3)、小鼠睾丸支持细胞(15P-1)和小鼠B型精原细胞(GC-1)的增殖活性的影响;  2.采用Annexin V-FITC/PI法检测小鼠睾丸间质细胞、小鼠睾丸支持细胞和小鼠B型精原细胞经二甲双胍干预后的凋亡情况;  3.采用流式细胞术检测二甲双胍对小鼠睾丸间质细胞、小鼠睾丸支持细胞和小鼠B型精原细胞周期的影响;  4.采用实时荧光定量PCR法检测二甲双胍对小鼠睾丸间质细胞、小鼠睾丸支持细胞和小鼠B型精原细胞周期关键蛋白cyclin B1、cyclin D1的影响;  5.采用Western Blot法检测二甲双胍对小鼠睾丸间质细胞、小鼠睾丸支持细胞和小鼠B型精原细胞中AMPK磷酸化水平的影响。  结果:  1.MTT结果显示二甲双胍可显著抑制小鼠睾丸间质细胞、小鼠睾丸支持细胞和小鼠B型精原细胞的体外增殖能力,并呈现明显的浓度依赖性和时间依赖性;  2.Annexin V-FITC/PI染色显示二甲双胍并未增加小鼠睾丸间质细胞、小鼠睾丸支持细胞和小鼠B型精原细胞阳性细胞的比例,推断二甲双胍可能没有诱导这三种细胞发生凋亡;  3.流式细胞术检测发现二甲双胍可显著增加处于G2/M期的小鼠睾丸间质细胞、小鼠睾丸支持细胞和小鼠B型精原细胞所占的比例,推断二甲双胍可能会诱导这三种细胞周期阻滞在G2/M期;  4.实时荧光定量PCR显示二甲双胍可下调细胞周期关键调节蛋白cyclin B1和cyclin D1 mRNA的表达;  5.Western Blot显示二甲双胍显著增加小鼠睾丸间质细胞、小鼠睾丸支持细胞和小鼠B型精原细胞中AMPK在Thr172位点的磷酸化水平,提示二甲双胍能够激活它们的AMPK信号通路。  结论:  1.二甲双胍显著抑制小鼠睾丸间质细胞、小鼠睾丸支持细胞和小鼠B型精原细胞的体外增殖;  2.二甲双胍通过诱导小鼠睾丸间质细胞、小鼠睾丸支持细胞和小鼠精原细胞周期阻滞在G2/M期,激活AMPK信号通路,发挥其对小鼠睾丸间质细胞、小鼠睾丸支持细胞和小鼠精原细胞的体外抑制作用。
其他文献
化石能源的不断燃烧利用,人们正面临着能源危机、环境危机。各国正在努力寻找开发新型绿色能源。能源战略已经成为各国战略中的战略。氢能,具有来源丰富、高效清洁、可再生等优
化学机械抛光(chemical mechanical polishing,CMP)是高精密光学器件和超大规模集成电路制造技术中最为有效的平坦化技术之一。随着高精尖技术的发展,对工件表面精度的要求越
哈茨木霉是一种重要的生物防治真菌,能拮抗多种植物病原菌如立枯丝核菌、齐整小核菌、尖孢镰孢菌、烟草疫霉等。在哈茨木霉拮抗病原菌的过程中病原菌会产生物理或化学信号分
当生长介质中存在多种碳源时,细菌通常利用优先碳源,同时抑制其它碳源的代谢而达到最佳生长,这种现象称为碳代谢物抑制。不同细菌的碳代谢物抑制调节机制和调控蛋白存在差异,