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背景:二甲双胍作为胰岛素的增敏剂,是临床上治疗2型糖尿病的常用药。近年的研究提示,除了降糖作用,二甲双胍亦有许多其他作用,例如降低血压、心血管保护和抗肿瘤作用。在生殖方面,采用二甲双胍联合用药可用于改善女性的多囊卵巢综合征,但有关二甲双胍与男性生殖的研究甚少。如今,不孕不育问题日益严峻,而糖尿病因影响精子发生又会间接导致男性不育。因此,随着育龄男性患糖尿病人数的增加,明确二甲双胍对男性生殖细胞的影响,将为临床治疗糖尿病男性患者的不育问题提供一定的理论基础。 目的:通过研究二甲双胍对小鼠睾丸发育相关细胞株增殖、凋亡及周期的影响,初步探讨二甲双胍在小鼠睾丸发育中作用的分子机制。 方法: 1.采用MTT法检测不同浓度的二甲双胍对小鼠睾丸间质细胞(TM3)、小鼠睾丸支持细胞(15P-1)和小鼠B型精原细胞(GC-1)的增殖活性的影响; 2.采用Annexin V-FITC/PI法检测小鼠睾丸间质细胞、小鼠睾丸支持细胞和小鼠B型精原细胞经二甲双胍干预后的凋亡情况; 3.采用流式细胞术检测二甲双胍对小鼠睾丸间质细胞、小鼠睾丸支持细胞和小鼠B型精原细胞周期的影响; 4.采用实时荧光定量PCR法检测二甲双胍对小鼠睾丸间质细胞、小鼠睾丸支持细胞和小鼠B型精原细胞周期关键蛋白cyclin B1、cyclin D1的影响; 5.采用Western Blot法检测二甲双胍对小鼠睾丸间质细胞、小鼠睾丸支持细胞和小鼠B型精原细胞中AMPK磷酸化水平的影响。 结果: 1.MTT结果显示二甲双胍可显著抑制小鼠睾丸间质细胞、小鼠睾丸支持细胞和小鼠B型精原细胞的体外增殖能力,并呈现明显的浓度依赖性和时间依赖性; 2.Annexin V-FITC/PI染色显示二甲双胍并未增加小鼠睾丸间质细胞、小鼠睾丸支持细胞和小鼠B型精原细胞阳性细胞的比例,推断二甲双胍可能没有诱导这三种细胞发生凋亡; 3.流式细胞术检测发现二甲双胍可显著增加处于G2/M期的小鼠睾丸间质细胞、小鼠睾丸支持细胞和小鼠B型精原细胞所占的比例,推断二甲双胍可能会诱导这三种细胞周期阻滞在G2/M期; 4.实时荧光定量PCR显示二甲双胍可下调细胞周期关键调节蛋白cyclin B1和cyclin D1 mRNA的表达; 5.Western Blot显示二甲双胍显著增加小鼠睾丸间质细胞、小鼠睾丸支持细胞和小鼠B型精原细胞中AMPK在Thr172位点的磷酸化水平,提示二甲双胍能够激活它们的AMPK信号通路。 结论: 1.二甲双胍显著抑制小鼠睾丸间质细胞、小鼠睾丸支持细胞和小鼠B型精原细胞的体外增殖; 2.二甲双胍通过诱导小鼠睾丸间质细胞、小鼠睾丸支持细胞和小鼠精原细胞周期阻滞在G2/M期,激活AMPK信号通路,发挥其对小鼠睾丸间质细胞、小鼠睾丸支持细胞和小鼠精原细胞的体外抑制作用。