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糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病(diabetic mellitus,DM)最常见和最严重的慢性并发症之一,是导致糖尿病致死率及致残率升高的主要原因。现代医学认识到DN是以肾脏肥大、弥漫性肾小球基底膜(glomerular basement membrane,GBM)增厚、系膜区细胞外基质(extra cellular matrix,ECM)增加、肾小球弥漫性硬化或结节型病变为主要特征的肾小球硬化症。其发病是由以持续高血糖为启动因素的糖脂代谢紊乱、血流动力学改变、多种细胞因子激活及遗传背景等多因素的综合作用。但是早期DN起病症状隐匿,不易及早发现,待患者出现明显临床症状,尿蛋白阳性时,病变已进展到不可逆的阶段。目前现代医学在治疗上仍以去除病因如降糖、降压、调脂、合理饮食运动等配以血管紧张素转化酶抑制剂(angiotension converting enzyme inhibitors, ACEI)或者血管紧张素Ⅱ受体阻滞剂(angiotensinⅡreceptor blockers, ARB)治疗为主。若发展到终末期肾病(end stage renal disease,ESRD),则主要依赖肾脏移植和透析治疗。故本病的早期诊断,及早干预,对阻止DN的进展意义重大。目前,早期DN的诊断手段主要为检测尿蛋白和尿微量白蛋白(urinary micro albumin,UMA)。但这种方法的不灵敏性难以在DNⅠ~Ⅱ期就作出有效诊断。肾组织穿刺活检诊断虽然准确,但这种创伤性方法却很难在临床上推广普及。因此,探索更灵敏、准确的早期DN的无创诊断方法势在必行。本实验通过对早期DN大鼠尿液代谢产物进行高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)分析,希望能够发现代谢标志物,及早对DN作出诊断,进行干预,阻止进展。同时西医治疗早期DN无特效方法,引导我们将希望转向传统医学,中医药在临床防治DN上确有一定的疗效。DN症状与中医学“消渴病”传变肾消、水肿、尿浊、关格、虚劳等范畴相类似。早期病机以气阴两虚,瘀血阻络为主,虚实夹杂,互为因果。本实验遵循中医辨证施治的原则,确立益气活血,标本兼治的治疗方法,以自拟三芪汤为治疗主方,观察其对早期DN大鼠的干预作用,发挥的中医治疗特色和优势,弥补现代医学治疗上的不足。目的:研究早期DN(Ⅱ期)大鼠尿液代谢产物的改变及自拟三芪汤对早期DN(Ⅱ期)大鼠的一般情况、血糖、肾功能、肾组织病理、尿液代谢产物等方面的干预作用。并通过对尿液代谢图谱进行分析,从代谢组学的角度探索早期DN无创性诊断方法的可能性和自拟三芪汤对早期DN的干预效果,为进一步研究早期DN尿液标志物和深入探讨自拟三芪汤作用机制奠定基础。方法:本实验选用体重180-200g、健康的雄性Wistar大鼠40只,随机分为假手术组10只,DN模型组和自拟三芪汤治疗组各15只。采用右肾切除加腹腔一次性注射链脲佐菌素(STZ)法制作早期DN模型,以血糖达标且连续检测3天不变者作为入选标准。自拟三芪汤治疗组给予自拟三芪汤灌胃,假手术组和DN模型组给予等量的蒸馏水灌胃。8周后,观察大鼠一般状况,取血液、尿液检测血糖、血肌酐、尿素氮、24小时尿微量白蛋白,切取左肾进行病理形态学(HE染色、PAS染色、电镜)观察,并应用高效液相色谱仪检测大鼠尿液代谢图谱。结果:1.自拟三芪汤能够明显改善DN(Ⅱ期)大鼠一般状况,阻止体重减轻(P <0.01),降低其肾脏肥大指数(P<0.01)。2.自拟三芪汤能够明显降低DN(Ⅱ期)大鼠的血糖(P <0.01)。3.自拟三芪汤能够明显改善DN(Ⅱ期)大鼠的血肌酐、尿素氮(P <0.01)。4.自拟三芪汤能够明显减轻DN(Ⅱ期)大鼠肾小球的病理损害。5.尿液代谢图谱反映DN(Ⅱ期)大鼠在15min和20min波峰面积Area(A1、A2)及其比值A1/A2,15min和20min波峰高度Height(H1、H2)及其比值H1/H2有明显的变化(P <0.01)。说明DN(Ⅱ期)大鼠尿液中两种代谢产物出现了含量变化。自拟三芪汤对上述指标有一定的改善作用,但无统计学意义(P >0.05)。结论:1.在DN(Ⅱ期)大鼠尿液中有两种代谢产物出现了明显的含量变化,这两种代谢产物有可能为早期DN的代谢标志物,证明通过检测尿液代谢产物的变化早期诊断DN是可能的。2.自拟三芪汤可以改善早期DN(Ⅱ期)大鼠一般情况,明显降低其血糖,保护其肾功能,减轻其病理损害,充分验证了自拟三芪汤的临床疗效。同时自拟三芪汤还并能对尿液代谢物产生一定的干预作用,但未出现统计学差异,可能与给药时间不够、给药剂量不足有关。