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芥菜(Brassica juncea)几丁质酶基因BjCHI1受伤害、茉莉酸、虫食、真菌侵染等的诱导,因此BjCHI1启动子是一个诱导型启动子.克隆BjCHI1启动子并阐明其功能,对了解芥菜几丁质酶基因BjCHI1在植物与病原反应中的表达调控模式具有重要的应用价值和理论意义.将芥菜基因组DNA分别用Dra Ⅰ、EcoR V和Sma Ⅰ酶切,酶切片段与一特殊的接头连接.按照BjCHI1基因的cDNA序列设计基因特异引物,取连接产物为模板,以接头引物和基因特异引物进行PCR扩增,在Dra Ⅰ酶切-连接体系里得到一PCR特异产物,回收PCR产物,克隆到pGEM-T Easy载体上,并测序,将其序列与GenBank中的已知序列进行比较,发现该序列3′端120bp的序列与BjCHI1 cDNA 5′端的己知序列完全一致,证明分离到了BjCHI1基因的上游序列.用PLACE数据库对该启动子进行分析,发现它含有类似于TATA-box的元件,是一个新的启动子(1098bp).HindⅢ和BamH Ⅰ双酶切pBI121质粒,去掉约0.8kb的35S启动子片段,回收大片段,并与同样经HindⅢ和BamH Ⅰ双酶切的BjCHI1启动子片段连接,构建成与报告基因gus融合的植物表达载体pBICHP.电激法将植物表达载体pBICHP转入根瘤农杆菌EHA105,含有pBICHP的EHA105经活化并用乙酰丁香酮诱导后,用1mL塑料注射器将大约100μL菌液注入刚展开的烟叶两叶脉之间.注射完后烟草植株放回培养箱,28℃,16h/d光照,3天后在注射区取烟草叶片进行GUS组织化学检测分析表明,芥菜BjCHI1启动子片段能够驱动gus基因的表达,证明所克隆的1098bp的芥菜BjCHI1启动子片段具有启动子活性.