实体瘤的生长、浸润和转移离不开肿瘤血管的形成，血管生成受到血管生成促进因子和抑制因子的双重调控。内皮抑素(endostatin)是1997年由O’Reilly等从小鼠血管内皮瘤培养液中分离到的一种血管生成抑制因子，也是目前发现的作用最强烈的血管生成抑制因子。初步研究表明，内皮抑素能通过抑制肿瘤血管内皮细胞的生长、移行，进而抑制肿瘤的生长和转移。但由于抗血管生成疗法总体上仅能抑制肿瘤生长，并不能彻底清除肿瘤，因此，联合传统疗法已成为当今肿瘤治疗研究的热点。而迄今为止，有关内皮抑素联合化疗针对肺腺癌的治疗研究，国内外报道尚少。鉴此，本文采用基因工程技术，观察内皮抑素基因表达产物对血管内皮细胞的影响，并分别观察内皮抑素基因转移及其联合顺铂对肺腺癌A549移植瘤的抑制作用。旨在为临床治疗肺癌提供新的策略和依据。 第一部 逆转录病毒介导内皮抑素基因转移及其表达产物对血管内皮细胞的生长抑制作用 目的：探讨逆转录病毒介导内皮抑素基因转移的方法，及其表达产物人内皮抑素对人血管内皮细胞的作用。 方法：以逆转录病毒为载体，转导内皮抑素(Endostatin)基因至肺腺癌A549细胞，获得含内皮抑素基因的A549／Endo细胞。PCR方法检验外源性内皮抑素基因在宿主细胞中的整合和表达。培养转染内皮抑素基因的A549／Endo细胞，收集上清液，ELISA法检测上清液中内皮抑素蛋白的浓度。MTT法观察该上清液对血管内皮细胞EA.hy926的抑制作用，流式细胞仪(FCM)、原位细胞凋亡法(TUNEL)分析内皮抑素引起血管内皮细胞的凋亡情况，免疫组化、原位杂交分别检测内皮抑素作用后内皮细胞内Bcl-2蛋白、BcI-XL蛋白、Bax-mRNA的表达情况，同时检测内皮细胞内Caspase-3活性水平。 结果：PCR法证实A549／Endo基因组中整合有外源性内皮抑素基因，RT-PCR内皮抑素基因转移联合顺铂对肺腺癌A549的实验研究中文提要法证实Endostatin基因能有效表达mRNA。A549zEndo细胞(一又10，/m一)培养48h后，ELISA法测得上清液中内皮抑素蛋白含量为348士1 20pg/ml。MTT法显示含内皮抑素的上清液能明显抑制血管内皮细胞EA.hy926细胞的生长。流式细胞仪、原位细胞凋亡法显示内皮抑素可诱导EAhy926凋亡。同时检测到内皮抑素作用后的内皮细胞Bcl一2、Bd一xL蛋白表达量下降，caspase一3水平升高，而Bax一mRNA表达水平无明显变化。 结论:逆转录病毒能高效介导内皮抑素基因转移，内皮抑素基因表达产物能明显抑制人血管内皮细胞的生长，诱导凋亡是其作用机制之一，这种作用机制可能是通过下调Bcl一2、Bcl一X/L的表达来实现的。