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空间区域的不同是导致微生物基因多样性和种群丰度差异的最主要的因素。若尔盖高寒湿地的地理位置和气候条件都十分特殊,低纬度、高海拔、低气压、强辐射、低气温、高湿度赋予了该地区独特的微生物资源。尽管已有某些与青藏高原微生物多样性有关的工作,但是迄今为止尚未见关于此地区湿地水中微生物的研究报导。本文选择若尔盖高寒湿地水体作为研究对象,应用微生物分子生态方法与培养方法,开展微生物多样性研究,初步揭示其微生物种群多样性特征。研究结果不仅对于研究青藏高原生态环境的变化具有科学意义,也为进一步开发利用这一地区特有的微生物资源提供了基础信息。主要研究结果如下:
1.通过化学方法提取了湿地水样中的微生物基因组总DNA,用细菌16S rRNA基因通用引物进行PCR扩增,再经DGGE分离,获得细菌群落DNA特征指纹图谱。结果表明,6个样品的条带数量从17到22条不等,平均达到19条,细菌群落多样性较高。其中,花湖样品的多样性多于保护站。花湖的4个样品相互之间相似性较高,保护站2个样品之间相似性较高,花湖和保护站之间相似性较低。这种结果主要是由于花湖和保护站之间水环境上的差异造成的。
2.通过构建细菌16S rRNA基因文库及限制性片段长度多态性分析(ARDRA),与GenBank中最相似菌株的比较结果表明若尔盖高寒湿地水中的优势菌群是变形菌门(占总数的51.6%,其中包含24.2%的Alpha变形菌,14.5%的Beta变形菌和12.9%的Gamma变形菌)。除此以外,拟杆菌门占17.7%,疣微菌门占4.8%,未培养细菌则高达24.2%,这可能与该地区的特殊生境有关。
3.采用BIOLOG检测方法研究水中微生物群落功能多样性的差异。综合AWCD、丰富度指数和多样性指数可以看出,不同采样点微生物群落的代谢结构有着较明显的差异,1号水样微生物群落的代谢活性要高于其他4个水样。
4.分别于夏、冬两季采集若尔盖高寒湿地水样,利用传统培养及显微镜检的方法和现代分子生物学方法对其藻类多样性进行了研究。结果显示,夏季水样至少培养出4种绿藻,分别为普通小球藻(Chlorolla vulgaris Beij.)、浮球藻(Planktosphaeria gelatinosa G.M.Smith)、繁茂栅列藻(Scenedesmusabundans Kirchner)和柱状栅列藻(Scenedesmus bijuga Turp.),均属于绿球藻目(Chlorococcales),其中普通小球藻为优势藻种,并被分离纯化。显微镜检结果表明冬季水样中主要的藻类种群为硅藻。蓝藻16S rRNA基因文库中其主要类群为颤藻(Osillatoriales),色球藻(Chroococcales)和念珠藻(Nostocales),还发现一些与低温环境微生物相关的类群,如颤藻目细纤菌属(Leptolyngbya)。此外,基于分子的方法还发现此湿地中存在一簇系统发育关系相近的未知种属的蓝藻类群,其具体的分类地位及生态功能有待进一步深入研究。