【摘 要】
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目的:本项研究主要判断CXCL3在口腔组织及其鳞癌组织中m RNA和蛋白水平的差异情况及阐明其作用机理;探讨人口腔鳞状细胞癌HSC-4细胞中上调CXCL3对其恶性程度的影响。方法:通过R语言及Perl脚本,使用多个数据库分析CXCL3在口腔组织及其鳞癌组织中的表达情况,预后评价以及潜在的信号通路;此外还通过对口腔组织芯片进行免疫组化实验分析CXCL3的蛋白分布情况及其与患者数据之间的关联性;最后构
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目的:本项研究主要判断CXCL3在口腔组织及其鳞癌组织中m RNA和蛋白水平的差异情况及阐明其作用机理;探讨人口腔鳞状细胞癌HSC-4细胞中上调CXCL3对其恶性程度的影响。方法:通过R语言及Perl脚本,使用多个数据库分析CXCL3在口腔组织及其鳞癌组织中的表达情况,预后评价以及潜在的信号通路;此外还通过对口腔组织芯片进行免疫组化实验分析CXCL3的蛋白分布情况及其与患者数据之间的关联性;最后构建稳定转染过表达CXCL3和模拟转染CXCL3的HSC-4细胞进行CCK-8,流式细胞术,Transwell迁移实验和裸鼠移植瘤实验来分析CXCL3在体外和体内环境对HSC-4细胞增殖能力,凋亡水平以及迁移活性的肿瘤生物学作用;Western Bolt技术验证生物信息学分析所得的信号通路关键基因表达。结果:多个数据库测序数据显示,与正常组织相比,口腔鳞状细胞癌患者的CXCL3表达水平显著提高;Kaplan-Meier分析和Cox回归模型进一步显示患者体内CXCL3的m RNA转录水平越高则其总体生存率越低并且可以作为临床用以评估口腔鳞状细胞癌患者的特殊指标;使用基因富集分析中的KEGG分析显示Jak-STAT信号通路,细胞因子-细胞因子受体相互作用,MAPK信号通路和细胞凋亡等信号通路可能是CXCL3所涉及的肿瘤恶性表现的关键调控途径。免疫组织化学结果还表明,与正常组织相比,口腔鳞状细胞癌组织中的CXCL3评分明显提高,其上调水平与分期和淋巴结转移密切相关。CCK-8,Transwell迁移实验和流式细胞术实验显示升高CXCL3的表达水平可以显著的增长HSC-4细胞的生长率和迁移水平,降低HSC-4细胞的凋亡率;并且在小鼠左侧接种过表达CXCL3的HSC-4细胞的移植瘤的生长速率明显加快。与此同时,Western Bolt检测上述信号通路中所涉及的关键基因表达,发现上调CXCL3表达的HSC-4细胞的Bax和caspase9表达减小,而Bcl-2,p-STAT3,NF-Κb p65,p-ERK和STAT3的表达有不同程度的增高。随后使用ERK1/2阻断剂PD98059后,可以发现由CXCL3表达上调所引起的HSC-4细胞的生长异常和过度侵袭等恶性行为得到抑制,显示当中的关键信号调控途径是MAPK信号通路。结论:CXCL3在口腔鳞状细胞癌中表达提升并且其提升程度影响肿瘤的异常行为表现,而MAPK则是其调控肿瘤细胞一系列病变演化过程中的重要信号传导通路。
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