EphA2 S897位点磷酸化对鼻咽癌细胞侵袭转移能力和癌干细胞特征的影响

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目的:在胶质母细胞瘤和前列腺癌等肿瘤中,EphA2高表达促进肿瘤细胞的侵袭转移能力,并与肿瘤干细胞特征的维持密切相关。为探索EphA2 Serine897(S897)位点磷酸化在鼻咽癌细胞侵袭转移中的作用,本课题组前期建立了过表达S897位点突变EphA2(EphA2-S897A)的鼻咽癌5-8F细胞系,本研究以该细胞系及其对照细胞系为样本,分析EphA2 S897位点磷酸化对鼻咽癌细胞侵袭转移能力和鼻咽癌干细胞特征的影响。  方法:以过表达EphA2-S897位点突变的5-8F细胞系(5-8F-EphA2-S897A),空载体转染的5-8F细胞系(5-8F-vector)及未转染5-8F细胞系,进行如下实验:(1)采用划痕实验和transwell侵袭侵袭实验比较3株细胞系的体外迁移和运动能力;(2)采用相差显微镜观察TGF-α诱导的3株细胞系的EMT形态学变化,采用免疫印迹方法检测3株细胞系EMT标志蛋白(E-cadherin和Vimentin)的表达变化;(3)采用流式细胞术比较3株细胞系的侧群细胞数量,采用干细胞成球培养比较3株细胞系的成球能力;(4)采用裸鼠尾静脉注射肿瘤细胞建立肺转移模型,比较3株细胞系的体内转移能力。  结果:与对照5-8F鼻咽癌细胞系比较,过表达S897位点突变EphA2(EphA2-S897A)的鼻咽癌5-8F细胞系具有如下细胞生物学特征:(1)体外细胞迁移和侵袭能力明显降低;(2)TGF-α诱导的EMT受到显著抑制;(3)侧群细胞的数目明显减少,细胞成球能力明显降低;(4)肺转移瘤的数目及大小显著降低。  结论:EphA2-S897位点磷酸化促进鼻咽癌细胞的侵袭转移,诱导鼻咽癌细胞EMT,以及增强鼻咽癌干细胞的特性。
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