研究背景:人体共生菌群的相关研究尚在初级阶段,“正常菌群”范畴仍不清晰,但已能够筛选出大量与疾病相关的微生物。胃癌相关的菌群研究集中在胃部和幽门螺杆菌,近期研究提示了其他细菌也可能参与胃癌的发生发展,口腔可能是某些致病菌的储存地,结肠菌群与恶性肿瘤的化疗敏感性和毒副作用有关。为了确定胃癌病人的菌群与健康人相比有何特点,以及化疗、营养治疗对菌群的影响,我们设计了临床研究和随机对照动物实验,对胃癌病人的口腔与粪便菌群、化疗病人及小鼠的粪便菌群进行初探,试图寻找与疾病、化疗副反应相关的菌种。第一部分正常人与胃癌病人的消化道菌群差异目的:探究健康人与胃癌病人唾液、粪便菌群差异方法:收集健康对照组(n=26)与初诊胃癌病人(n=19)的唾液、粪便样本,对其中细菌的16S rDNAV3-V4进行提取、测序,OTU聚类后对比在线数据库Silva 132进行物种注释,分析4组样本物种组成特点与差异。结果:唾液、粪便中的细菌均主要由厚壁菌门(50%-70%)、拟杆菌门(15-20%)、变形菌门(9-18%)、放线菌门(2-9%)组成。相比健康人,胃癌组唾液中的放线菌科、消化链球菌科丰度更高,胃癌组粪便中的链球菌科、普氏菌科、双歧杆菌科的相对丰度更高。PCA、NMDS分析显示唾液与粪便菌群差异显著,2组唾液样本的组内和组间差异小于2组粪便样本。Anosim分析显示2组唾液的差异不显著,粪便差异显著。LefSe分析显示胃癌组粪便中富集链球菌科。结论:健康人唾液、粪便中的细菌均主要由厚壁菌门、拟杆菌门、变形菌门、放线菌门组成(丰度之和>90%),健康人唾液和粪便菌群差异显著,健康人和胃癌病人粪便菌群差异显著。胃癌病人粪便中链球菌科、普氏菌科、双歧杆菌科的丰度较高,其中链球菌科的增加可能提示有口腔菌定植于肠道。第二部分胃癌病人接受新辅助化疗前后菌群变化目的:探究新辅助化疗前后胃癌病人的唾液、粪便菌群变化方法:在新辅助化疗前、1-2程新辅助化疗后收集同一批胃癌病人(n=7)的唾液、粪便样本,对其中细菌的16S rDNAV3-V4进行提取、测序,OTU聚类后对比在线数据库Silva 132进行物种注释,分析4组样本物种组成特点与差异。结果:新辅助化疗后,胃癌病人唾液中的韦荣球菌属丰度增加,粪便中的乳杆菌属、肠志贺菌属、链球菌属丰度增加,粪梭杆菌属、双歧杆菌属、拟杆菌属丰度减少,其中韦荣球菌属、拟杆菌属的差异变化用LefSe分析具有统计学意义。结论:胃癌病人在新辅助化疗后,唾液中的韦荣球菌属丰度增加,粪便中的拟杆菌属丰度减少,新辅助化疗可能导致正常菌群减少,病原菌增加,引起胃癌病人肠道菌群紊乱。第三部分益生菌、益生元营养素对5-Fu化疗小鼠的肠屏障保护作用目的:探究益生菌及含益生元的肠内营养制剂对5-Fu化疗小鼠肠屏障的保护作用。方法:Balb/c雄性小鼠,随机分为1-对照组、2-化疗组、3-益生元营养素组、4-益生菌组、5-益生菌+益生元营养素组,每组5只,分别给予空白对照、5-Fu化疗、化疗+含膳食纤维的肠内营养、化疗+双歧杆菌三联活菌、化疗+双歧杆菌三联活菌+含膳食纤维的肠内营养的处理。测定实验前小鼠的粪便乳酸菌浓度,实验期间测定小鼠体重、每日饲料消耗量、腹泻情况、粪便菌群,实验结束时测定结肠绒毛黏膜厚度,小肠内容物菌群。结果:健康小鼠的粪便菌群主要由拟杆菌门和厚壁菌门组成(丰度之和>90%),乳酸杆菌属的活菌浓度为1.39×109CFU/g,其中主要包含动物乳杆菌、约氏乳杆菌、鼠乳杆菌。5组小鼠体重减少值:5组(-0.23±0.84)<1组(0.85±0.32)<4 组(1.04±0.99)<3 组(3.58±1.22)<2 组(3.86±1.14),P=0.024<0.05。小鼠平均进食量:3 组(6.55±1.82)<2 组(8.52±1.27)<4 组(11.88±0.58)<5 组(10.82±1.97)<1组(15.85±0.73),P<0.001。益生元营养素组于化疗结束第1天出现腹泻。各组的结肠绒毛黏膜厚度均值大小顺序为:2组(119.35±3.83)<3组(120.72±6.88)<4 组(125.68±5.78)<1 组(133.00±7.86)<5 组(134.23±6.24),P=0.344。5-Fu化疗期间纯化疗组厚壁菌门丰度减少,化疗结束后丰度回升至化疗前水平。结论:(1)健康小鼠的粪便菌群主要由拟杆菌门和厚壁菌门组成,粪便中乳酸杆菌属的活菌浓度为1.39×109CFU/g,主要含动物乳杆菌、约氏乳杆菌、鼠乳杆菌这3种;(2)5-Fu化疗可使小鼠食欲减退、体重下降,结肠绒毛黏膜变薄,使厚壁菌门丰度降低,但停止化疗4天后可自行恢复。双歧杆菌三联活菌可改善小鼠食欲,恢复结肠黏膜厚度。益生菌与含益生元的肠内营养合用可维持化疗小鼠的体重,保护肠黏膜屏障。第四部分胃癌病人的焦虑、抑郁情绪及疾病认知状况目的:探究胃癌初诊病人的焦虑、抑郁症状与疾病认知状况方法:使用抑郁自查量表(SDS)、焦虑自查量表(SAS)调查初诊胃癌病人(n=27),计算标准分并统计抑郁、焦虑症状的发生率;使用中文版疾病认知问卷(IPQ-70)调查胃癌初诊病人(n=23),统计症状识别、病因认知中出现率最高的因子,并计算疾病认知部分各维度条目的平均分,与中间分3分进行比较。结果:胃癌初诊病人中抑郁检出率为11.1%、焦虑检出率为0%,3名存在抑郁症状的病人均为轻度。病人认为最可能导致自己生病的因素是食物或进食习惯(13/23),其次是过去不良医疗或未及时就医(9/23),并列第3位的是细菌或病毒感染、吸烟、免疫力下降(5/23),与医学界公认的胃癌危险因素重合度较高。IPQ-70疾病认知部分得分:7个维度中疾病病程、后果认知、一致性、周期性、情绪表征低于中间分,治疗控制、个人控制的得分超过中间分结论:胃癌初诊病人中抑郁(11.1%)、焦虑(0%)症状的检出率较低;初诊病人对疾病已经有一定程度的正确认知,对疾病的认知表现出较为乐观的倾向。