红麻根结线虫病抗性鉴定及HcWRKY1基因的克隆表达分析

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WRKY类转录因子主要存在于植物中,参与植物的防卫反应、生长发育以及物质代谢调节等多种生物学过程。深入探究WRKY基因在植物抗病过程中的作用及其抗逆性机理具有重要的意义。本研究对120份红麻遗传资源进行了根结线虫病抗性鉴定,得到优异抗逆品种7份,并选择具有耐盐、抗炭疽病菌和中抗根结线虫病等优良性状的红麻福红992为材料,克隆得到红麻的WRKY基因:HcWRKY1,并对其进行了表达分析和功能的初步鉴定。结果如下:1、经田间自然发病鉴定结果表明:120份红麻遗传资源中有5个品种为高感、19个为中感、25个为中抗、71个为高抗;侵染红麻的根结线虫为南方根结线虫(Meloidogyne incognita)、爪哇根结线虫(Meloidogyne javanica)和花生根结线虫(Meloidogyne arenria)的混合种群。进行盆栽接种鉴定的25份遗传资源中,7份为中抗,其余分别为中感和高感品种,未发现高抗或免疫品种。2、获得了红麻HcWRKY1基因,该基因全长1126bp,包含102bp的5’UTR和112bp的3’UTR,915bp的开放阅读框,编码304个氨基酸的多态,属于WRKY类转录因子的第II a组成员。3、生物信息学分析表明,HcWRKY1编码蛋白为水溶性蛋白,其分子式为C1443H2325N4350463S13,相对分子量为33.6KDα,pI值为8.88;该蛋白含有正电荷残基(精氨酸+赖氨酸)42个,负电荷残基(天冬氨酸+谷氨酸)36个。4、半定量RT-PCR以及qRT-PCR分析表明,HcWRKY1基因的表达受NaCl、PEG、机械损伤及低温等胁迫诱导,且具有组织特异性,根中表达水平最高。5、构建了 pCAMBIA1304-HcWRKY1-GFP表达载体,亚细胞定位结果表明HcWRKY1定位于细胞核内;构建了正义表达载体pCAMBIA1301-HcWRKY1,采用花絮侵染法转化拟南芥,PCR鉴定表明HcWKY1在拟南芥中成功表达。
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