肠宁方对溃疡性结肠炎大鼠血清TNF-α、IL-17及结肠NF-κB mRNA表达影响的研究

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目的:观察肠宁方灌肠对溃疡性结肠炎模型大鼠的一般状况、结肠黏膜病理改变、结肠NF-κB m RNA含量及血清中TNF-α与IL-17水平的影响,探讨肠宁方治疗溃疡性结肠炎的可能机制。材料与方法:随机将50只体重(190±10)g,6-8周龄的雄性SPF级SD大鼠分为造模组(40只)及空白组(10只)。适应性喂养一周后,造模组采用三硝基苯磺酸-乙醇复合模型造模法造模,造模组禁食不禁水24h后,将橡胶管从造模组大鼠肛门插入8cm后,以50mg/kg给药量注入TNBS-50%乙醇溶液,空白组予等体积生理盐水灌肠。造模成功后将造模组随机分为模型组、肠宁方组、美沙拉嗪组、锡类散组,共4组,每组10只。造模成功后第3天开始给药治疗,空白组、模型组、肠宁方组、美沙拉嗪组、锡类散组分别予生理盐水、生理盐水、肠宁方煎剂、美沙拉嗪灌肠液、锡类散混悬液,依次按2ml/次、2ml/次、6.8g/kg、6.25g/kg、0.1g/kg给药方法灌肠给药,治疗过程中密切观察大鼠一般状况,连续治疗7天后全部大鼠禁食不禁水24h,麻醉后腹主动脉取血处死大鼠,肉眼及光镜观察结肠粘膜组织变化,ELISA法检测血清中IL-17及TNF-α的含量,RT-q PCR法检测结肠组织中NF-κB m RNA水平。结果:1.一般状况:造模组大鼠造模期间可见大鼠进食饮水量下降,嗜睡懒动,毛发稀疏无光泽,体重下降,粘液状稀便,肛门周围有秽物黏着,便隐血试验呈阳性。治疗期间模型组大鼠进食饮水量下降,精神萎靡,拱背蜷缩,毛发干枯易脱落,体重进一步下降,黏液脓血便,便隐血试验持续阳性,DAI评分均高于空白组(p<0.01),治疗后各用药组一般状况与模型组对比均有不同程度改善,以肠宁方组症状改善最为明显,各组DAI评分均低于模型组(P<0.01),其中肠宁方组DAI评分与美沙拉嗪组及锡类散组相比下降更为显著(p<0.05),CMDI评分美沙拉嗪组及肠宁方组均低于锡类散组(p<0.05)。2.病理状况:模型组大鼠可见结肠溃疡,多及肌层或浆膜层,可见结构破坏,周围可见坏死水肿、炎性浸润,基底隐窝破坏。各治疗组病理均有不同程度改善,溃疡多及粘膜下层或浅肌层,周围可见炎性浸润,基底隐窝不规则、可见脓肿形成。3.ELISA结果统计:与空白组结果相比,模型组大鼠血清中IL-17及TNF-α含量高于空白组(p<0.01),于模型组相比,美沙拉嗪组、肠宁方组、锡类散组大鼠血清中IL-17及TNF-α含量低于模型组(p<0.01),与锡类散组相比,美沙拉嗪组及肠宁方组大鼠血清中IL-17及TNF-α含量低于锡类散组(p<0.05)。4.NF-κB m RNA结果统计:与空白组相比,模型组大鼠结肠中NF-κB m RNA表达高于空白组,与模型组相比,美沙拉嗪组、肠宁方组、锡类散组大鼠结肠中NF-κB m RNA表达低于模型组(p<0.01),肠宁方组与美沙拉嗪组之间大鼠结肠中NF-κB m RNA表达差异无统计学意义。结论:1.肠宁方可以改善溃疡性结肠炎模型大鼠的精神状态、活动情况、进食饮水量、体重及大便情况等一般状况,DAI评分改善情况优于美沙拉嗪及锡类散。2.肠宁方对于溃疡性结肠炎模型大鼠具有一定的治疗作用,其机制可能与降低大鼠血清中TNF-α与IL-17含量,降低结肠组织中NF-κB m RNA表达有关。3.肠宁方对溃疡性结肠炎大鼠血清TNF-α与IL-17含量、结肠组织中NF-κB m RNA表达、CMDI评分及病理损伤的改善效果与美沙拉嗪大致相同。
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