卵黄免疫球蛋白,又称卵黄抗体,是禽类血清中的IgG进入到卵黄中而形成的一类免疫球蛋白。由于鸡属于非哺乳动物,与人类亲缘关系较远,因此对人类的病原体及哺乳动物高度保守蛋白质能产生强免疫应答。这种鸡源的特异性多克隆抗体(IgY)选材方便、提取较易、又可规模化生产,在食品及口服被动免疫治疗领域有着巨大的应用前景。 奶牛乳腺炎是奶牛养殖业中发病率最高、流行最快、造成损失最大的疾病之一。常用的抗生素防治手段会造成动物体内或其产品内药物的残留和抗药性或耐药性的增强,间接危害人类健康。因此寻找一种高效、安全的抗生素替代品不仅必要,而且迫切。 本研究利用奶牛乳腺炎最常见的致病菌:金黄葡萄球菌和大肠杆菌免疫蛋鸡,制备出抗上述两种混合菌的卵黄抗体。通过Bradford法、SDS凝胶电泳、ELISA等手段对IgY的理化、生化性质进行了研究。在获得足量IgY的基础上,对奶牛乳腺炎常见致病菌进行体外抑菌实验,并与常用抗生素的抑菌能力进行比较。得到了以下一些有意义的结果: 确定了水溶法-二次盐析-凝胶过滤的提取流程。 针对抗混合菌卵黄抗体建立了相应的ELISA抗体活性检测方案,并对检测条件进行了优化。 改进了二次盐析的实验条件,经检测抗体活性较传统方法提高近1.2倍。 采用凝胶过滤柱对特异性抗体进行纯化。从曲线趋势上看,与标准IgY非常相近,经过峰面积的积分计算,可得特异性IgY的纯度达90%以上。经过凝胶过滤层析纯化后的IgY样品,再次洗脱得到的目的峰峰型十分对称,且无杂质峰,可见纯化效果很好。 体外抑菌试验表明,IgY在菌浓度为10~3 cfu/ml条件下能在固体平板培养基中显著抑制两种菌落的生长。液体培养基抑菌检测,最小抑菌浓度为35mg/ml。 采用K-B纸片法比较IgY与抗生素抑菌能力,结果显示,抗单菌的卵黄抗体对其它菌无交叉抑菌能力,而抗混合菌特异性IgY则对两种菌均有显著的的抑制能力。但IgY抑菌圈平均直径要小于抗生素抑菌圈4mm左右。 本实验成功制备出高活性、抗奶牛乳腺炎常见致病菌的特异性卵黄抗体。同时优化了制备流程。为卵黄抗体在食品、兽医领域上的实际应用打下了基础,并对下一步治病机理的研究摸索了条件。