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目的:调查临床分离的多药耐药铜绿假单胞菌的β-内酰胺类、氨基糖苷类、整合子及转座子遗传标记相关耐药基因分布状况,并分析多重耐药菌株的亲缘性。方法:应用PCR法对20株分离于临床的多药耐药PAE菌进行了12种β-内酰胺酶基因、1种膜孔蛋白编码基因、6种氨基糖苷类修饰酶基因和2种16SrRNA甲基化酶基因、2种I类整合子遗传标记和1种转座子遗传标记检测,并进行DNA测序印证,采用多基因聚类分析法(算法:UPGMA),以耐药基因以及Ⅰ类整合子、转座子遗传标记为分子标记作检测结果的样本聚类分析。结果:164株铜绿假单胞菌对β-内酰胺类药物复方氨苄西林,头孢唑肟,头孢噻肟,头孢曲松,复方替卡西林,复方哌拉西林,头孢吡肟,头孢他啶,亚胺培南,美罗培南的耐药率分别为96.9%、95.1%、93.9%、91.4%、40.2%、33.5%、29.2%、25%、7.92%、4.2%。对氨基糖苷类药物庆大霉素、阿米卡星、妥布霉素的耐药率分别为:60.9%、42%、40.8%。20株多药耐药PAE菌中CARB、oprD2、aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅱ、ant(2″)-Ⅰ、intⅠ1、qacE△1-sul1、merA阳性率分别为:15%、100%、70%、15%、15%、85%、85%、85%,其它基因均阴性,20株PAE菌聚类分析,可分三群,其中A克隆携带aac(3)-Ⅱ、merA、intⅠ1、qacE△1-sul1基因和伴oprD2缺失;B克隆仅为oprD2缺失;C克隆(5-10-16,3株)携带CARB、aac(6’)-Ⅱ、ant(2”)-Ⅰ、merA、intⅠ1、qacE△1-sul1基因和伴oprD2缺失。结论:本组多药耐药PAE菌携带多种耐药基因,其中oprD2基因全部缺失,整合子及转座子遗传标记基因阳性率较高,可能是本组多药耐药铜绿假单胞菌多药耐药的主要机制。菌株亲缘性分析结果表明多重耐药PAE菌存在克隆传播,并致院内感染流行。