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目的应用PI3K/AKT/m TOR信号通路阻滞剂LY294002及Rapamycin对鱼藤酮诱导的帕金森病大鼠进行干预性研究,观察通路相关蛋白PI3K、p-AKT、p-m TOR及氧化应激相关指标SOD、GSH、GSH-XP、MDA含量的变化,明确PI3K/AKT/m TOR信号通路对帕金森病模型大鼠黑质区氧化应激的影响。方法1动物分组健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠96只分为对照组(sham组)、帕金森病组(PD组)、LY294002阻滞剂组(LY294002组)及雷帕霉素阻滞剂组(Rapamicn),再将各组雄性大鼠随机分成帕金森病模型制备成功后的4d、8d两个亚组(每组12只)。2帕金森病模型制备采用颈背部皮下注射鱼藤酮(Rotenone,Rot)制作帕金森病大鼠模型。3给药方法侧脑室药物注射:用灭菌玻璃微量吸液管通过管架链接脑立体定位仪,定点大鼠前囟为穿刺点,上下及水平调整刻度标0.9mm及1.5mm,针尖渗透入大鼠头骨2-3mm后,在5min内将LY294002组及Rapamycin组分别缓慢匀速注入10mmol/L的LY294002溶液10ul/kg(Rapamycin 80ng/ml,4μl)后,留针5min缓慢拔针。4测定大鼠黑质区PI3K、p-AKT及p-m TOR蛋白表达及含量变化情况,检测手段为免疫组织化学法及Western-blotting法测定。5测定大鼠黑质区氧化应激相关指标SOD、GSH、GSH-XP、MDA含量的变化,检测方法为分光光度法。6免疫组化切片采用BX53全自动显微镜扫描系统进行拍照,并应用Image-Pro Plus 8.0对结果进行整合;蛋白免疫印迹条带使用Image J分析系统处理。7数据结果以统计学程序进行处理与分析,计量资料用Own-way Anova方法处理多组间值。结果1 PI3K免疫组织化学及Western-blotting检测结果:与对照组相比,PD模型组(4 d、8 d)两时间点大鼠黑质区PI3K蛋白表达增高显著(P<0.05),8 d组蛋白表达较4 d组表达上升,PI3K蛋白在PD大鼠黑质区高表达(P<0.05);与PD组相比,PI3K蛋白表达在LY294002组及Rapamycin组(4d、8d)中无明显改变,(P<0.05)。2 p-AKT免疫组织染色及Western-blotting检测结果示:与对照组相比PD模型组(4 d、8 d)两时间点大鼠黑质区p-AKT蛋白表达增高显著(4 d、8d),8 d组蛋白表达较4 d组表达上升,p-AKT蛋白在PD大鼠黑质区高表达(P<0.05);与PD组比较,LY294002组(4 d、8 d)两时间点p-AKT蛋白表达显著下降(P<0.05);Rapamycin组(4 d、8 d)两时间点p-AKT蛋白表达无明显变化(P<0.05)。3 p-m TOR免疫组织化学及Western-blotting检测结果示:与对照组相比PD模型组(4 d、8 d)两时间点大鼠黑质区p-m TOR蛋白表达增加明显(P<0.05),8 d组蛋白表达较4 d组表达上升,p-m TOR蛋白在PD大鼠黑质区高表达(P<0.05);与PD组相比LY294002组与Rapamycin组(4 d、8 d)两时间点pm TOR蛋白表达显著下降(P<0.05)。4氧化应激指标SOD分光光度检测结果:与对照组相比,PD模型组各时间点SOD活力降低(P<0.05),8 d组氧化指标较4 d组减低明显,与PD组相比,LY294002组及Rapamycin组各个时间点SOD氧化指标升高(P<0.05)。5氧化应激指标GSH分光光度检测结果:与对照组相比,PD模型组(4 d、8 d)两时间点GSH活力降低(P<0.05),8 d组氧化指标较4 d组减低明显,与PD组相比,LY294002组及Rapamycin组各个时间点GSH活力升高(P<0.05)。6氧化应激指标GSH-XP分光光度检测结果:与对照组相比,PD模型组(4 d、8 d)两时间点GSH-XP氧化指标降低(P<0.05),8 d组氧化指标较4 d组减低明显;与PD组相比,LY294002组及Rapamycin组各个时间点GSH-XP氧化指标升高(P<0.05)。7氧化应激指标MDA分光光度检测结果:与对照组相比,PD模型组(4 d、8 d)两时间点MDA氧化指标(P<0.05),8 d组氧化指标较4 d组升高明显,与PD组相比,LY294002组及Rapamycin组各个时间点MDA活力降低(P<0.05)。结论1 PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白在帕金森病模型大鼠黑质高表达,可能与帕金森病的发生、发展有关。2 PI3K/AKT/m TOR通路对鱼藤酮诱导的帕金森病模型大鼠黑质氧化应激有促进作用。